江苏拷贝数变异数字PCR

（5）在SARS-CoV-2核酸参考品制备中，数字PCR能够对核酸进行精确的定量，能够提高世界各国SARS-CoV-2核酸测量结果的一致性和准确性。（6）数字PCR能够灵敏检测与定量环境中的病毒RNA浓度，包括从不同环境中取样的样本（如公共区域、病房、医院卫生间、实验室操作员手套、废水等等）。（7）在实验室样品与临床样品病毒突变检测中，数字PCR适合用于已知的SARS-CoV-2遗传变异检测，特别是对于一些低频突变。（8）在抗病毒药物的研发过程中，病毒载量的变化是评估药物有效性的重要指标，借由数字PCR提供的***定量结果，能够给出更具说服力和准确的评价结果。对干扰分子（背景信号、PCR抑制剂等）耐受度高，通过信号的“有”“无”定量而不是Ct值。江苏拷贝数变异数字PCR

该技术提出至今虽然只有十几年时间，但是由于其独特的技术优势和应用前景，使得其产业化发展相当迅速。迄今为止，已有包括Fluidigm和 Bio-Rad等几家公司相继推出了数字 PCR 产品，并已经应用于单细胞分析、**早期诊断和产前诊断等研究领域。目前，有关数字 PCR 技术的综述类文献并不多见，本文将在现有文献基础上，对该技术的原理、定量方法、分类及应用进行评述，并对发展趋势进行展望。数字 PCR 技术提出至今，相关技术和产业化发展都非常迅速。迄今为止，数字 PCR 技术主要有三类: 微反应室/孔板、大规模集成微流控芯片和液滴数字PCR系统。上海数字PCR售后服务通过锁核酸修饰的引物增强了对互补序列的亲和力和特异性，即使是微小表达差异也可以轻松检测。

数字PCR 的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值，因此不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线，具有很好的准确度和重现性，可以实现***定量分析。在未来十年内，医学保健的目标是提供质量高效的个性化医疗。PCR 方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR，数字PCR 技术有着无可比拟的优势和***的应用前景。应用领域：突变/稀有变异检测（Mutation/Rare variant detection）拷贝数变异（Copy-number variation）进入外周循环（包括血液和粪便）的**组织核酸分析无创产前筛查转化移植检测药理学（Pharmacogenetics）基因表达分析（Geneexpression analysis）-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析数字PCR可以验证二代测序(NGS)。

CRISPR-Cas9基因编辑结果验证：CRISPR-Cas9技术的发明，是基因编辑技术的一大突破，但如何验证实验是否成功，仍需要高灵敏度的检测方法，数字PCR技术可以满足这一需求。Broad研究所张锋团队发明了以CRISPR为基础的SHERLOCK技术可以对核酸进行高灵敏度的定性检测，但精确定量评估时仍采取了数字PCR进行确认。*****的伴随诊断：常用体液来源（如血液，胸腹水，唾液及尿液等）的待检标本中的DNA，有正常脱落体细胞和病变脱落细胞两种来源，前者的量远大于后者。通过微液滴处理能在每个微液滴中有效减少正常体细胞DNA的干扰，实现**标记物的有效检测，如EGFR，ALK，ROS1，KRAS、BRAF等基因的突变检测、乳腺*/胃*的HER2基因扩增检测等，应用于**精细医学的伴随诊断。线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析。

优势：不依赖Ct值，无需标准曲线，即可实现真正的***定量高精确度、高灵敏度，荧光定量qPCR灵敏度为1%-0.1%，数字化PCR灵敏度可达0.01-0.001%。对干扰分子（背景信号、PCR抑制剂等）耐受度高，通过信号的“有”“无”定量而不是Ct值。数字PCR研究基因表达遇到基因丰度非常低的，或者样本浓度低的，可以选择数字化PCR，通常CT值大于30的时候，荧光定量qPCR的精确度和重复性会**降低，这个时候可考虑数字化PCR。外泌体里面的micRNA含量是非常低的，提取外泌体也是个非常费时费钱的事情，千辛万苦提取出来的样本，保险起见，用数字化PCR是非常不错的一个选择，而且也非常便宜。数字PCR需要进行分区后扩增。上海数字PCR售后服务

数字PCR分区方法主要包括3种：微流体数字PCR、微滴数字PCR和芯片数字PCR。江苏拷贝数变异数字PCR

甲基化分析：DNA甲基化是哺乳动物DNA的一种常见表观遗传修饰，它通过调节细胞中的基因表达从而在发育和疾病过程中发挥了重要的作用。异常的DNA甲基化涉及整个基因组的整体低甲基化和位于基因启动子区域和基因间DNA的CpG岛的局部超甲基化，这是人类恶性**中一个常见的表观遗传改变。基于PCR的方法已经被***的应用于DNA甲基化的评估，其原理是先采用亚硫酸氢盐来处理DNA，这会通过脱氨基作用将未甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，然后设计与这些DNA进行特异结合的引物和探针进行扩增检测。然而，传统的PCR检测容易受到PCR抑制剂的影响，在非甲基化等位基因的背景下进行稀有甲基化等位基因检测的敏感性有限。而数字PCR是在无数个**的分隔之中进行反应，因此彼此之间较少受到抑制剂的影响，能够对传统方法检测不到的罕见甲基化等位基因进行精细的检测，未来有望将DNA甲基化作为一个具有区域性*变的预测指标或者**风险生物标志物来使用。江苏拷贝数变异数字PCR