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与传统qPCR技术相比，数字PCR技术具有极高的灵敏度、特异性和精确性，但截止目前而言，数字PCR对广大科研工作者仍然是一种全新的检测方法，我们在看待数字PCR的应用前景时，更应该保持一种开放的心态，与其说数字PCR技术是一个新的检测平台，不如把它视为一种全新的技术思路和手段，在这个平台上必将有更多的应用帮助我们深入到分子生物学研究的更高层次。数字PCR被称为第三代PCR技术，相比于传统的PCR技术和荧光定量PCR技术，其具有诸多优势：（1）***定量，不依赖标准品和参考曲线，定量结果更加准确可靠；（2）高灵敏度，可实现单分子级检测；（3）高分辨率，适合在大量背景模板的干扰下对罕见的目标分子进行检测；（4）高稳定性，对抑制剂的耐受程度**增强。凭借这些优势，数字PCR被广泛应用于多个不同的领域[4]，特别是生物医学领域，包括稀有突变检测、基因拷贝数变异检测、基因表达研究、甲基化水平检测、**液体活检、无创产前检测、微生物（病毒、细菌等）检测、移植排斥监控和二代测序辅助建库等。此外，此技术也被用于农业、食品安全和环境科学等诸多领域。通常CT值大于30的时候，荧光定量qPCR的精确度和重复性会**降低，这个时候可考虑数字化PCR。天津准确数字PCR欢迎咨询
可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。同时，从公式也可以看出，随着反应阳性体系数（X）的增加，体系中目标分子的拷贝数相对于X会有较大的差距，随着X的持续增加，数字PCR结果的不确定度也随着提高，总体来说，数字PCR阳性体系的数量不得超过总体系数量的80%。另一个方面，N的增加会使整个数字PCR体系具有较大的线性范围，并可以提高反应的灵敏度、稳定性以及可重复性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情况下，增加分配的腔室数和液滴数。天津准确数字PCR欢迎咨询原始数据中往往发现阳性信号与阴性背景之间存在许多弱阳性信号。
数字PCR作为新一代PCR技术，采用芯片载体将PCR反应体系分配到20000个微孔中，实现单分子模板的扩增，通过荧光信号的有无来判断每个微孔的阴阳性**终利用泊松分布校正结果给出***定量值（copy/ul），利于精细定量样品中的拷贝数，且灵敏度高（0.1%），即使针对血液中低频的ctDNA检测也同样适用。数字PCR技术在血液cfDNA低突变丰度检出中的出色表现，以及涵盖多种变异形式（SNV、InDel、融合和扩增）的检测能力，均证明其作为液体活检领域的重要“神技”，可广泛应用于医疗机构、临检中心和科研院所等。
该技术提出至今虽然只有十几年时间，但是由于其独特的技术优势和应用前景，使得其产业化发展相当迅速。迄今为止，已有包括Fluidigm和 Bio-Rad等几家公司相继推出了数字 PCR 产品，并已经应用于单细胞分析、**早期诊断和产前诊断等研究领域。目前，有关数字 PCR 技术的综述类文献并不多见，本文将在现有文献基础上，对该技术的原理、定量方法、分类及应用进行评述，并对发展趋势进行展望。数字 PCR 技术提出至今，相关技术和产业化发展都非常迅速。迄今为止，数字 PCR 技术主要有三类: 微反应室/孔板、大规模集成微流控芯片和液滴数字PCR系统。基因丰度非常低的，或者样本浓度低的，可以选择数字化PCR。
值得注意的是，在gDNA长度≥20kb或进行拷贝数变异检测实验时，必须对样品进行酶切处理，确保大片段DNA序列或串联序列在酶切处理后，模板随机且均匀的进入**反应体系，以实现准确和精确的定量。数字PCR实验离不开包含有Mg2+、dNTP、Buffer和DNA聚合酶等PCR反应所需要的MasterMix。随着实验的不断深入，对于实验条件的要求也不断提高，其中DNA聚合酶对实验的准确性起着至关重要的作用。由于非热启动的DNA聚合酶在反应体系易使引物在室温条件下发生非特异性扩增，直接影响实验结果。数字PCR需要进行分区后扩增。天津准确数字PCR欢迎咨询
制药公司巨头罗氏等也有数字PCR产品在研。天津准确数字PCR欢迎咨询
数字PCR可以直接计算目标序列的拷贝数，因此无需依赖于对照样品和标准曲线就可以进行精确的***定量检测；此外，由于数字PCR在进行结果判读时*判断有/无两种扩增状态，因此也不需要检测荧光信号与设定阈值线的交点，完全不依赖于Ct值的鉴定，因此数字PCR的反应受扩增效率的影响**降低，对PCR反应抑制物的耐受能力**提高；数字PCR实验中标准反应体系分配的过程可以极大程度上降低与目标序列有竞争性作用的背景序列浓度，因此数字PCR技术也特别适合在复杂背景中检测稀有突变。天津准确数字PCR欢迎咨询