重庆RRBS技术服务售后服务

联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法（COBRA）

这种方法是将亚硫酸氢盐处理与酶切相结合来进行甲基化检测。DNA样本经亚硫酸氢盐处理后，利用PCR扩增。扩增产物纯化后用限制性内切酶（BstUI）消化。若其识别序列中的C发生完全甲基化(5mCG5mCG)，则 PCR扩增后保留为CGCG，BstU I能够识别并进行切割；若待测序列中，C未发生甲基化，则PCR后转变为TGTG，BstUI识别位点丢失，不能进行切割。这样酶切产物再经电泳分离、探针杂交、扫描定量后即可计算出原样本中甲基化的比例。

这种方法**的优点就是相对简单，可进行快速定量，且需要的样本量少。然而，它的局限性也十分明显，只能获得特殊酶切位点的甲基化情况，且阴性结果并不能排除样品DNA中存在甲基化的可能。 强化版RRBS技术及应用是高性价比方案。重庆RRBS技术服务售后服务

    甲基化是表观修饰的重要部分，DNA甲基化可以引起DNA构象、稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而影响基因表达。DNA链中含有很多CpG结构，双链DNACpG中的胞嘧啶五位碳原子通常容易被甲基化，基因组中60~90%的CpG都被甲基化，未甲基化的CpG成簇出现在基因启动子**序列或者转录起始位点。DNA甲基化转移酶可以催化CpG的甲基化反应。DNA甲基化转移酶有两种，Dnmt1是一种持续性甲基化转移酶，作用于只有一条链甲基化的DNA双链，使其完全甲基化，参与DNA复制过程中新合成链的甲基化修饰；Dnmt3a/Dnmt3b是一种从头甲基化转移酶，可以在CpG上产生新的甲基化修饰，首先半甲基化，继而全甲基化，该甲基化转移酶可能参与细胞生长分化的调控，在**基因甲基化中起到重要作用。近年来CRISPR/Cas9技术得到快速发展，在基因切割活性失活的dCas9的5’端融合一个Dnmt3a，能够通过dCas9介导特定位点的甲基化修饰，调控相关基因的表达。 北京技术服务欢迎咨询6mA在细菌、藻类及动植物基因组中存在。

    DNA甲基化（DNAmethylation）是指在DNA甲基化转移酶（DNMT）催化下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。哺乳动物基因组中，DNA甲基化多发生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。DNA甲基化是一种表观（epigenetic）修饰，它在不改变DNA序列的情况下，对个体的生长、发育、基因表达模式以及基因组的稳定性起到重要的调控作用，这种修饰是可逆的，并且这种修饰在发育和细胞增殖的过程中是可以稳定传递的。近年来的大量研究表明，DNA异常甲基化与**的发生、发展、细胞*变有着密切的联系。DNA甲基化在**中的作用主要表现在以下几个方面：一是甲基化的CpG岛二核苷酸中的胞嘧啶以较高的频率脱氨基变成胸腺嘧啶，造成碱基突变；二是抑*基因和DNA修复基因由于超甲基化而沉默；三是*基因甲基化水平降低而活化；四是基因组总体甲基化水平降低使转座子、重复序列活化导致染色体稳定性下降。这些因素是导致**发展、转移、恶化**终导致患者死亡的重要原因。其中后三个方面源于甲基化水平的改变，而甲基化的过程是可逆的，因此可以甲基化位点为靶点，靶向用药进行**的预防、***。

    cfDNA，cellfreeDNA，就是血液中游离的自身DNA，这些DNA多是从身体的细胞或者白血球破裂释放出来的，基本上都是无害的，不用多久会被自身清理掉。不过值得一提的是，当孕妇怀孕的时候，胎儿的DNA也会同时释放到母亲的血液里头去，这是当前火热的无创唐氏筛查的基础。通过抽取母亲的外周血测序分析其中的游离DNA就可以判断胎儿是否存在整个染色体或者大片段DNA的变异。有研究已经证实，**患者外周血中的cfDNA总量，要高于健康人。通过这一点，虽然不能武断的说cfDNA能成为**标志物，但是cfDNA的含量增多，能起到一个较好的提示作用，作为一个初筛的手段。基于cfDNA的液态活检中，尽管ctDNA在**诊断中的应用是当下cfDNA*****，研究**深入的分支。但是，cfDNA作为液态活检，不只是局限于**学。例如，有研究报道对于接受***移植手术的病人，可以通过监测术后外周血中具有捐献者基因特征，片段化的cfDNA含量变化，来评估移植***的排斥情况。 基于高通量测序平台的甲基化图谱分析。

血清甲基化用于乳腺*转移早期筛查

Methylation patterns in serum

DNA for early identification of disseminated breast cancer. Genome

Med. 2017;22;9(1):115. (IF=

8.898)

本课题通过RRBS甲基化测序筛选组织(n=31)样本, 确定了18个乳腺*特异性甲基化位点，选择其中6个位点在大样本量血清样本(n=110)中得到进一步验证; 并通过更大量血清样本(n=1344), **终筛选出血清EFC#93甲基化位点为早期诊断和***转移性乳腺*Biomarker。 WGBS和RRBS都是金标准技术, CNS发表文章都很多，广发被接受。山东MeDIP-Seq技术服务

全基因组甲基化分析及特异位点甲基化检测。重庆RRBS技术服务售后服务

安捷伦公司芯片平台因其强大的eArray探针设计平台，可以进行芯片的定制。在甲基化领域同样适用。合作伙伴利用Agilent芯片平台设计了一款专门针对**启动子区域CpG岛的甲基化芯片。绝大多数基因是针对基因的启动子区域的CpG岛设计探针。这款芯片上一共有4160个功能注释比较明确的基因，其中2128个和**发生有关系。从功能上分，有256基因和细胞凋亡有关，1273个基因和信号传导有关，487个基因和压力和衰老有关。采用的是8*60K的芯片格式。利用MeDIP原理进行甲基化检测的方法探针的分辨率可以精确到100 bp。重庆RRBS技术服务售后服务