上海透明带打孔压电核转移

单精子显微注射技术——解决因精子问题导致的不育症在自然受孕过程中，精子需要经历一系列复杂的生理反应，包括顶体反应、穿越透明带等，才能与卵子结合。然而，当男性存在严重的少精子症、弱精子症或畸形精子症时，这些自然过程可能无法顺利完成，导致不育。此时，单精子显微注射技术便成为了一种有效的解决方案。单精子显微注射技术针对男性精子问题而设计，也被称为第二代试管婴儿技术，其**在于通过显微操作，将单个精子直接注入卵母细胞的胞浆内，从而绕过自然受精过程中精子需要穿越卵子透明带的障碍。单精子显微注射的操作过程即使用一根极细的显微操作针，将经过筛选的单个精子注入到卵母细胞的胞浆内。这一过程需要极高的精确度和技巧，以确保精子能够成功进入卵子。受精成功后，受精卵将被培养至早期胚胎阶段，并移植到母体子宫内，以期实现妊娠。PRIME TECH 公司生产的PMM 150FU为全世界较早的压电破膜仪。上海透明带打孔压电核转移

Piezo-ICSI程序:使用直径100-mm的细胞培养皿上盖,准备操作盘；按照Piezo操作系统的要求，将4μL左右的汞从后部装入注射针中，轻轻将汞推至针尖处，在20-25℃室温下，准备进行显微操作。具体操作前，首先取10枚卵母细胞置于15L含3%suerose的HEPES-CZB操作滴中备用；然后将2.5μL精子溶液与5pLHEPES-CZB+12%PVP-360操作滴充分混合；再将单个精子从尾部吸入注射针，用Piezo脉冲从颈部断开头和尾；连续剪切5个精子后，将吸入全部精子头的注射针转移到放置卵母细胞的操作滴中，准备将精子头逐个注射至卵母细胞质中。注射时，从时钟9点的方向吸住卵母细胞，使纺锤体保持在6点或12点的位置，从3点的方向轻轻进针，同时用Piezo脉冲击穿透明带，将透明带碎片吹出注射针的同时，将精子头吹至针尖处，继续进针，直至针尖插入卵母细胞深处，几乎贴近对侧质膜时，用Piezo弱脉冲击穿卵母细胞质膜，将精子头吐出，回吸注入卵内多余的操作液，轻轻退针，完成一次注射。依次操作，尽快实现该批卵母细胞的注射，室温放置5min,然后用大量CZB溶液洗涤ICSI胚胎，并且移入CO₂箱培养。依法进行第二批卵母细胞的精子头注射，在注射HCG后17h,完成全部卵母细胞的精子注射。透明带压电RNA注射PMM 6 MB-U-2高力度输出型号，它可进行克隆和ICSI等方面的许多操作。

注射—将含一个已制动精子的注射管轻柔刺破透明带和卵膜，进入卵母细胞中心。注入精子时，应尽可能少地带入培养液。之后使用负压破坏卵膜，随后轻柔抽吸细胞质。精子置入、穿过卵膜和抽吸细胞质以***卵母细胞的不同方法对受精和胚胎发育率的影响是一个研究热点。压电辅助的ICSI是一种新型方法，目前已在有ICSI结局不良病史和MⅡ期卵母细胞有限的患者中使用。在ICSI操作过程中，该技术对卵母细胞的损伤较小且可改善受精率和胚胎质量。目前使用压电驱动管的新型ICSI注射技术已成功用于多种哺乳动物。由于该注射器采用超声切割力(而不是刺穿力)穿透卵膜，注射过程中卵母细胞几乎没有变形，因此其对卵母细胞的损伤大幅减少。该技术实现的存活率和成功率同样高。注射后，根据标准实验室方案培养卵母细胞。受精ICSI后，受精率为50%-80%。虽然ICSI不可保证一定受精，但完全受精失败的发生率较低，通常发生于获卵数较低的周期。受精失败的原因通常不是未置入精子或卵母细胞排出精子。其可能是由于卵母细胞***失败，这通常与卵母细胞质量较差或精子无活性有关。

虽然Piezo-ICSI对于大龄试管准妈妈们的***来说非常有意义，但这项技术的使用却对生殖中心有着比较高的门槛。日本英医院拥有三台Piezo-ICSI仪器，仪器的显微镜来自日本精工企业，手动精密操作台来自德国。作为**精密仪器，它的每一个组件成本都达百万，整体造价超过千万。使用Piezo-ICSI不单单是设备升级，对培养师的操作要求和难度也是直线升级的。具体说来，因为受精操作是在高倍显微镜下利用操作杆来进行的，需要培养师同时配合操作观察操作杆、显微镜、受精针和显示屏。这么听起来是不是感觉难度似乎还可以？然而事实上，在操作的过程中，培养师需要不断的进行距离判断的「切换」：想象一下，**挪动1cm，镜下实际只会挪动0.1mm，但出现在视野中的范围，实际上会有5cm那么大！PMM 6 MB-D-2中等力度输出型号，适用于ICSI、ES细胞注射、活检操作等。

以piezo操作系统为技术支撑，在掌握小鼠卵母细胞胞浆内精子注射技术(ICSI)的基础上，进行了ICSI技术生产试管小鼠及转基因小鼠的尝试。实验结果表明以Hepes-CZB+3％蔗糖做操作液，用来自成年KM鼠附睾尾的新鲜精子头和pEGFP-N1质粒孵育处理冻融精子头，直接注射到B6D2F1小鼠卵母细胞质中，注射后1h，83.3％的卵母细胞仍然存活，鲜精组和冻精组各有92.3％和83.0％成活卵子排出极体、出现原核。用CZB溶液继续培养ICSI胚胎，两组的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率分别为(97.8％vs94.7％)、(64％vs64.5％)、(5％，vs24.7％)。其中桑椹胚率、囊胚率均***低于体内受精对照组(64％，64.5％vs88％；5％，24.7％vs70％P＜0.01)；将鲜精组原核期120枚胚胎和82枚2-cell胚胎及冻精组135枚原核期胚胎移植后移植到同期km假孕母鼠受体内，分别出生28只、3只、18只ICSI小鼠(黑色或灰色)，效率分别为23.3％，4％，13.3％。健康成年的31只ICSI小鼠，没有明显的生理和行为异常。随机抽取六对鲜精组性成熟ICSI小鼠做交配实验，一个月后都有小鼠出生(平均窝产10.7只)。本实验表明，ICSI精子载体法可以比较高地制造小鼠转基因胚胎，小鼠附睾新鲜精子及无抗冻剂保护冷冻致死精子都具有足够的全程发育潜力。PMM可用于移去卵细胞内的染色体,它可以用平口针迅速的穿透透明带,而无须用尖头针。日本细胞内膜打孔压电细胞注射

PMM仪器在临床实践中已经取得了明显的成果，受到了医生和患者的一致好评。上海透明带打孔压电核转移

Piezo-ICSI令人欣喜的结果早在1999年，《人类》杂志上就发表了关于普通ICSI和Piezo-ICSI在受精率、受精之后退化率（终止分裂率）及妊娠率等方面的数据对比。结果显示，Piezo-ICSI是非常有效的一项技术。通过这种「不强迫」、「不刺激」的「温柔手法」，Piezo-ICSI可以明显提高受精率，且对**终的妊娠结果也起着非常积极的作用！作为平均患者年龄39岁的生殖中心，日本英医院接诊了众多的大龄患者，深知大龄患者由于卵子老化、卵子质量下降，更容易出现受精率和囊胚养成率不高的情况，**终导致试管成功率偏低。因此，盐谷院长决定引进Piezo-ICSI这项技术，来帮助解决大龄患者遇到的难题。通过对比42岁以上患者使用Piezo-ICSI技术后的培养结果，我们发现：受精率、分裂率及囊胚养成率都有所提升，特别是***的囊胚养成率，总体提高了35.9%。44岁患者通过Piezo-ICSI取卵2颗养成2颗囊胚Piezo-ICSI技术在处理卵子时可以**小化对卵子的损伤，因此英医院针对所有40岁以上的患者都在使用显微受精时用到Piezo-ICSI技术。发表于2019年11月的第64回日本生殖医学会的学术报告中，也从临床数据上再次确认了Piezo-ICSI的有效性。上海透明带打孔压电核转移