杭州鼠尾胶原厂家供应

鼠尾胶原胶凝程序：胶原蛋白I按以下步骤使其pH达到碱性时凝胶。1）将无菌5cm左右的纱布海绵贴在150mm培养皿的盖子上来制备氨蒸气室。用氢氧化铵使纱布饱和，把盖子放在150mm的培养皿上，暂放置一边。2）将胶原蛋白I均匀涂布在要包被物的表面上，厚度可以根据需要改变，胶原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的盖玻片。对于直径100mm的培养皿，每个加入约6mL;对于60mm培养皿添加约2.3mL，对于35mm培养皿添加约1mL。3）将涂有胶原蛋白的盖玻片或带有盖子的培养皿转移到氨蒸气室并暴露三分钟。4）在无菌蒸馏水中（35mm培养皿加5mL，60mm培养皿加10mL等）浸泡涂布的盖玻片或培养皿30min。吸取原蒸馏水并加0.5-1.0mL无菌蒸馏水，放置在层流罩中过夜。5）吸出蒸馏水，用含血清的平衡盐缓冲液溶液代替并保存在2-8°C。成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性。杭州鼠尾胶原厂家供应

鼠尾胶原实验应用：鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用。目的：建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果：自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞，细胞角蛋白18表达阳性，免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论：成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法，并且制作简便,成本低廉。唐山鼠尾胶原厂家供应制备鼠尾胶原：离心，4000转/分，10-15分钟。

胶原蛋白分离提纯实验方案：提取鼠尾胶原蛋白的实验步骤：1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液对初步处理的鼠尾腱进行酶解，持续一段时间待混合物变成无色、透明、粘稠液体后即可在4℃，5000g的离心力下离心20min，收集上清即为粗制鼠尾胶原蛋白原液。2、将一定浓度的氯化钠溶液加入其中，持续搅拌直至白色絮状沉淀从溶液中析出，继续加入氯化铵直至沉淀不在析出为止，4℃，5000g的离心力下离心20min后获得白色沉淀。沉淀物加入一定浓度的醋酸溶液中溶解。3、将溶解后的鼠尾胶原蛋白溶液继续反复进行盐析处理，重复步骤2的过程2~4次。_x005f_x000c_鼠尾胶原蛋白经SDS-PAGE蛋白质电泳。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。

一种海狸鼠尾胶原手术缝合线制备方法，其特征在于，步骤如下：(1)胶原纺丝液的配制：将备用的海狸鼠尾筋切成薄片，用无花果蛋白酶进行酶解处理，再用双氧水溶液杀酶；将杀酶后的切片用蒸馏水冲洗，然后用乙酸溶液溶胀，把溶胀后的切片分散搅拌，然后用滤网过滤，除去杂质及不溶胀物，然后把该溶液离心脱泡制得胶原纺丝溶液；(2)手术缝合线纤维的成形：将胶原纺丝液装入立式向上湿法纺丝机的纺丝液贮罐中，用氮气挤压入含有pH＝8-11、质量浓度为50-80％的硫酸钠溶液的立式凝固浴中凝固成型，再经过质量浓度为60-90％的乙醇水溶液的脱水浴脱水，再经过假捻器加捻，合股后再进入含有pH＝9-11、质量浓度为0.8-1.2％戊二醛的交联浴中交联，经过水浴水洗，再经第二次加捻，除去水及交联剂，干燥后，在卷绕辊上卷绕即得手术缝合线。鼠尾胶原醋酸溶解：按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。

三维胶原的制备：鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X体积的0.1mol/LNaOH来中和。需要的溶液(均需要无菌、预冷):10xPBS(可含10mg/L的酚红用于pH指示)或10x培养液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),双蒸水A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。胶原蛋白按其应用可以分为食品级、一般级、医药级。珠海正规鼠尾胶原厂家

胶原蛋白是结缔组织和内脏部位外基质的主要成分。杭州鼠尾胶原厂家供应

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用：胶原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2诱导。24h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与结论:两组培养皿中,随着过氧化氢浓度的增高,均可见细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降,细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高,Bcl-2/Bax比值明显降低,呈剂量依赖性。杭州鼠尾胶原厂家供应