上海微滴式数字PCR简介

数字PCR采用的策略概括起来非常简单，就是“分而治之”（divideandconquer）［1］，这种做法非常类似于计算机科学中的“分治算法”，将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中，在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板)，实现“单分子模板PCR扩增”，扩增结束后，通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。在实际的数字PCR实验中，事实上是通过呈现两种信号类型的反应器比例和数目进行统计学分析，计算出原始样本中的模板拷贝数。具备一键式自动化操作。上海微滴式数字PCR简介

数字PCR（DigtalPCR）是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段，于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中，使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时，加入可检测荧光。待扩增结束时，使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数，从而定量检测样本中的核酸浓度。基于分液方式的不同，数字PCR主要分为3种：微流体数字PCR(MicrofluidicdigitalPCR，mdPCR)、微滴数字PCR(DropletdigitalPCR，ddPCR)和芯片数字PCR(ChipdigitalPCR，cdPCR)。上海微滴式数字PCR简介CRISPR-Cas9基因编辑结果验证。

研究方向甲基化含量鉴定作为表观遗传学研究中重要的一个研究方向——甲基化程度分析，现阶段有不同的方法或技术来进行研究：如传统的亚硫酸氢盐处理后的克隆测序统计法、抗体检测法、定量PCR检测法等。这些方法皆因方法学的问题而不能获得精确的定量，而微滴式数字PCR系统通过对样品的微滴化处理及目标因子的***拷贝数定量，为甲基化程度的精确定量检测提供了一种全新 的技术。*****的伴随诊断常用体液来源(如血液，胸腹水，唾液及尿液等)的待检标本中的DNA，有正常脱落体细胞和病变脱落细胞两种来源，前者的量远大于后者。通过微液滴处理能在每个微液滴中有效减少正常体细胞DNA的干扰，实现**标记物的有效检测，如EGFR，ALK，ROS1，KRAS、BRAF等基因的突变检测、乳腺*/胃*的HER2基因扩增检测等，应用于**精细医学的伴随诊断。

MicroDrop-100系统产品特点：一、适应性广，灵活性高1、理论上可覆盖qPCR（荧光定量PCR)的所有应用2、样本多样性，样本通量可达96个样本，支持灵活设定3、开放式平台，支持用户自行开发试剂、产品。二、灵敏度高，准确性高1、***定量——无需依赖标准曲线2、采用微滴式技术高达100,000个的微滴3、线性范围达到6个数量级，灵敏度高达万分之一三、可分析复杂混合物1、准确度不完全依赖于扩增效率2、双通道荧光检测，支持EvaGreen染料及探针法3、支持多重数字PCR四、操作简单，使用方便1、全封闭防污染设计，一键式自动化操作。2、可选全中文分析软件无创产前筛查：低成本、快速。

要了解为什么传统PCR存在限制，务必要了解PCR反应过程中发生了什么。基本PCR运行可以分为三个阶段：指数期每个循环积聚的产物准确加倍（假定**反应效率）。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。线性期（高变异性）随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的PCR产物不再加倍。平台期（终点：使用传统方法进行凝胶检测）反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统PCR进行测量，又称为终点检测。可使用第三方PCR反应液，配备PCR A300（温度范围4°C-98°C，扩增模块温控精度±0.2°C）。南京国产数字PCR报价

检测灵敏度高达万分之一。上海微滴式数字PCR简介

二代测序辅助建库目前靶向测序建库方法包括扩增子方法，在均相溶液中，当扩增引物增加时，由于扩增引物之间的相互作用，从而影响扩增的效率;如果将其分散到大量微液滴中扩增，将可降低引物间相互作用，提高扩增效率。同时还可以实现对于少量模板的有效扩增，得到更多的有效测序数据。CRISPR-Cas9基因编辑结果验证CRISPR-Cas9技术的发明，是基因编辑技术的一大突破，但如何验证实验是否成功，仍需要高灵敏度的检测方法，数字PCR技术可以满足这一需求。Broad研究所张锋团队发明了以CRISPR为基础的SHERLOCK技术可以对核酸进行高灵敏度的定性检测，但精确定量评估时仍采取了数字PCR进行确认。上海微滴式数字PCR简介

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