上海广东数字PCR解决方案

数字PCR（DigtalPCR）是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段，源于于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中，使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时，加入可检测荧光。待扩增结束时，使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数，从而定量检测样本中的核酸浓度。基于分液方式的不同，数字PCR主要分为3种：微流体数字PCR、微滴数字PCR和芯片数字PCR，数字PCR仪器目前是市场测试校准高的。液体活检：早筛、用药、监测、复发。上海广东数字PCR解决方案

相对于二代测序、基因芯片和定量PCR而言，数字PCR具备以下优势:●灵敏度可达到单个核酸分子：检测限低至0.001%，主要系为数字PCR可以实现靶标DNA/RNA的生物浓缩；●无需标准曲线活参照基因进行对比来测定核算量，可对靶分子起始量进行***定量，直接独处DNA分子 的个数；●适合环境复杂样品的检测：终点PCR检测，不依赖Ct值，不依赖扩增效率，能克服PCR 剂的影响，避免样品间的交叉 问题，适合各类复杂环境中的样本进行 定量，如动血样、粪便、尿液、痰液、水样、土壤、植物等；南京广州永诺数字PCR原理能检测低至0.01%的突变基因。

数字PCR检测及分析原理在上世纪90年代就被提出来了，但是无奈受限于当时的技术条件，样本稀释及分配都是靠手工来完成的，受到很多因素的干扰和限制；并且结果分析对于研究者来说也十分枯燥与繁琐，因此在很长一段时间dPCR发展停滞不前。后来由于微流控技术与微纳集成制造工艺的发展解决了dPCR过程中的几个关键技术问题，推动了dPCR的研究与商业化的发展。目前根据dPCR样本稀释分配的方式，基本可分为三大类，一种是基于大规模集成微流控芯片；第二种是使用微反应室/孔板；第三种是微滴式。但不论是走芯片式还是微滴式，其基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或者微滴当中，每个反应器的核酸模板数少于1或者等于1。经过PCR扩增之后，有一个核酸分子的模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，可以推算出原始溶液的核酸浓度。

dPCR的基本原理目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。流式检测，顺序逐一检测每个微滴，无荧光交叉干扰，微滴阴性阳性判读准确。

数字PCR（DigtalPCR）是一种核酸定量精密检测的新兴技术手段，于20世纪由Vogelstein等提出。它是将稀释后的核酸模板分配到大量不同的反应单元中，使每个反应单元中有一个或没有核酸。利用PCR扩增的同时，加入可检测荧光。待扩增结束时，使用统计学方法采集每个反应单元出现的荧光次数，从而定量检测样本中的核酸浓度。基于分液方式的不同，数字PCR主要分为3种：微流体数字PCR(MicrofluidicdigitalPCR，mdPCR)、微滴数字PCR(DropletdigitalPCR，ddPCR)和芯片数字PCR(ChipdigitalPCR，cdPCR)。样本多样性，样本通量可达96个样本，支持灵活设定。常州广东数字PCR哪家好

高灵敏度——数字PCR的灵敏度与同体积反应体系的分割份数成正比。上海广东数字PCR解决方案

MicroDrop-100系统产品特点：一、适应性广，灵活性高1、理论上可覆盖qPCR（荧光定量PCR)的所有应用2、样本多样性，样本通量可达96个样本，支持灵活设定3、开放式平台，支持用户自行开发试剂、产品。二、灵敏度高，准确性高1、***定量——无需依赖标准曲线2、采用微滴式技术高达100,000个的微滴3、线性范围达到6个数量级，灵敏度高达万分之一三、可分析复杂混合物1、准确度不完全依赖于扩增效率2、双通道荧光检测，支持EvaGreen染料及探针法3、支持多重数字PCR四、操作简单，使用方便1、全封闭防污染设计，一键式自动化操作。2、可选全中文分析软件上海广东数字PCR解决方案

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