湖北新款口腔拭子

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    同样唾液和口腔拭子中核酸提取方法与血液的提取方法相似包括以下4个过程：1.通过裂解液裂解口腔脱落细胞，释放核酸物质。2.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质，去除其他杂质。3.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。4.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。传统的提取方法由于核酸提取纯化过程耗时长，成本较高，步骤繁多，增加了基因污染的风险。因此需要一种血液、唾液和口腔拭子样本经过简单处理就可以作为模板进行荧光PCR扩增检测方法，满足科研和医学领域快速检测的要求。技术实现要素：本发明提供了一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。该发明通过快速简单处理口腔拭子和血液样本，且无需纯化可直接用于荧光PCR扩增的DNA。10分钟内即可得到应用于ARMS-PCR反应体系的模板DNA。同时优化ARMS-PCR荧光体系，在反应液中加入防污染UDG酶以及提高Taq酶稳定性的的BSA，从而实现血液和口腔拭子基因组快速荧光PCR扩增检测。该方法快速简单，成本低廉，检测灵敏，且用该方法提取的基因组与商品化试剂盒提取的基因组的检测结果相近。官方授权经销口腔拭子口腔拭子的绒毛质地可采集更多目标分析物。

    加入20μteinaseK溶液，混匀。加入200μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，在56℃放置14min（期间颠倒混合样品数次），溶液应变清亮，若未完全变清亮，延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇，充分振荡混匀10s，此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm（~13，400×g）离心2min。将吸附柱放置新的，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50～200μL洗脱缓冲液，室温放置2～5分钟，12,000rpm（~13，400×g）离心2min，将溶液收集到离心管中，测定浓度及纯度后，取3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6，本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21～25之间，荧光扩增曲线呈典型的S型。

    本发明的特征在于：应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测，主要步骤如下。（1）将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀。（2）将步骤（1）中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，至沉淀完全散开，然后5000g离心30s，弃上清。（口腔拭子样本则无需进行此步骤）。（3）向步骤（2）所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1～2min；室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的基因组DNA；所述的核酸释放剂组成为20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺；所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2～图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。口腔拭子在使用时要握住手柄，将拭子伸进口腔用刷牙的力度同时旋转拭子，让拭子头部充分接触口腔粘膜。

    1根微细型鼻咽植绒拭子50支/盒6盒/箱货号产品名称规格902CSRK涂抹棒取样盒（配有1个SRK稀释液10ml的自立管、1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子）25支/盒902C2SRK涂抹棒取样盒（配有1个SRK稀释液10ml的自立管、1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子）250支/箱905CSRK涂抹棒取样盒（配有培养基自立管、涂抹棒粘胶纤维拭子、取样模具10*10cm各1个）10套/盒908CSRK涂抹棒取样盒（配有1个SRK稀释液、1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子）25支/盒167KS01塑料单独包装（1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子）1000支/箱155C管装单独包装（1个塑料涂抹棒粘胶纤维拭子）1000支/箱922CSRK取样运送管（配有10ml稀释液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子，独立包装于无菌袋里）1支/包926CSRK取样运送管（配有10ml稀释液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子）50支/盒929CSRK取样试剂盒（配有letheen肉汤培养基、适用于petrifilm纸片平板计数）50支/盒947CSRK取样运送管（配有4ml通用中和液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子）50支/盒947C2SRK取样运送管（配有4ml通用中和液、1个9cm塑料涂抹棒粘胶拭子）300支/箱938CSRK471取样盒（每小袋配有10ml稀释液、8个管装塑料涂抹棒聚酯纤维拭子）25支/盒954CSRKPHARMA，塑料涂抹棒。口腔拭子在使用前一定要先检查包装是否破损，如果有破损的话记得不要使用哦。湖北新款口腔拭子

口腔细胞采样时要撕开口腔拭子外包装，小心取出口腔拭子（注意：整个取样过程中手不能接触拭子部分）。湖北新款口腔拭子

    紫蓝色结节、瘘孔等，分泌物量、性质、颜色、气味等，阴道有无横隔、纵隔、斜隔、狭窄、闭锁、双阴道等畸形，宫颈大小、形状、色泽，有无糜烂、旧裂、赘生物、紫蓝色结节及接触性出血等，宫颈管分泌物性状，宫颈阴道段长度及双宫颈畸形等。盆腔检查检查前先排便，排便困难者可先导尿及服用缓泻剂，有阴道出血者需先消毒外阴并戴无菌手套；月经期一般不做盆腔及阴道检查；未婚者一般*作肛门指诊检查。

（1）双合诊：即阴道腹部双合诊。检查者戴无菌手套，以示指、中指蘸润滑液后顺阴道后壁轻轻插入，检查阴道有无肿块、狭窄、瘢痕、弹性等，子宫颈高度、大小、质地、硬度，有无举痛，后穹窿是否饱满，软硬度，有无弹性，结节、肿块、浸润、触痛。然后将另1手置于下腹壁与阴道内手指配合检查盆腔生殖器先作宫体触诊，注意子宫体大小、位置、形状、硬度、活动度及有无压痛。将内诊指放在一侧穹窿，双手检查附件与宫旁组织有无增厚、压痛、包块，如有肿块需查清大小、活动度、质地、形状，有无触痛以及与子宫有无粘连，有无向周围组织脏器浸润等，先查不痛的一侧，然后再查对侧。

（2）三合诊：又称阴道直肠腹部三合诊。用示指插入阴道、中指插入肛门内触诊。 湖北新款口腔拭子

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