多肽药物的安全性评估

静脉注射给予长春瑞滨造模斑马鱼抵抗力低下模型。大剂量长春瑞滨骨髓抑制明显，导致血小板、红细胞及白细胞数目（中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞等）减少和贫血，导致抵抗力低下。人类与斑马鱼在免疫系统的细胞组成上极为相似，而且斑马鱼是目前所有同时具有特异性免疫和非特异性免疫动物个体中体积较小的，适合高通量评价调节免疫功效。斑马鱼静脉注射大剂量长春瑞滨后可造成免疫低下。采用转基因T细胞红色荧光斑马鱼，可在荧光显微镜在观察到抵抗力低下的斑马鱼体内的T细胞荧光强度明显减弱药物功效评价-药物毒性安全性评价项目 。多肽药物的安全性评估

利用斑马鱼模型评价保护心肌作用。心肌损伤多数是由于炎症、缺血、冠状动脉狭窄等因素引发的心肌损伤，常表现为胸闷、胸痛、气短、四肢乏力、心慌、恶心呕吐等症状。斑马鱼心脏包含心房、心室和静脉窦，心电图谱也与哺乳动物类似。而且斑马鱼生长发育周期短，胚胎透明易观察，心脏在受精后48小时就发育完全，有利于开展心肌损伤保护剂的研究。盐酸异丙肾上腺素可以诱导斑马鱼心率加快，心肌持续收缩，心肌耗氧量持续增加，心脏由代偿性收缩转化为失代偿，终将导致心肌损伤，使心肌细胞凋亡。经过特异性荧光染色（凋亡细胞呈绿色），心肌损伤的斑马鱼在心脏部位会布满凋亡细胞，可以明显被观察到。新药安全性评估利用斑马鱼模型评价改善心动过缓功效。

斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成，与哺乳动物高度相似，可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三******磺酸（TNBS）可破坏肠道粘膜屏障，与肠组织蛋白结合形成抗原，发生变化反应，诱发结肠炎。杯状细胞主要分泌黏蛋白，形成黏膜屏障以保护上皮细胞，肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。我们可以应用特异性的染料（呈蓝色），观察肠道杯状细胞数目，评价肠道粘液分泌功能。  我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常对照组、模型对照组和服用肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理，模型对照组与服用肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS（TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内）。服用肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导肠道粘膜损伤之后摄入类似的肠道粘膜辅助保护剂。服用一段时间肠道粘膜辅助保护剂后，我们观察和分析肠道杯状细胞数目。

我们将受测试斑马鱼分成三组，分别是底物对照组、正常对照和服用供试品组（供试品通过溶解到养鱼用水中摄入到斑马鱼体内），并加入ROS特异性荧光检测试剂。服用供试品一段时间后，我们使用酶标仪对斑马鱼体内ROS进行荧光定量。可以看到，服用供试品组斑马鱼体内荧光值比正常对照组有明显升高。1.经过每组30尾斑马鱼的对比实验，服用供试品组的斑马鱼ROS水平明显高于正常对照组，与正常对照组存在明显性差异。2.本实验证实了该供试品诱发斑马鱼氧化应激。斑马鱼模型评价半数致死浓度。

正常成人的心率在每分钟60～100次之间，如果低于60次称为心动过缓，是心律失常的一个重要类型，患者平时有头晕、乏力、倦怠、精神差的症状。研究表明，斑马鱼心血管系统的发育与人高度相似，虽然斑马鱼是单心房单心室，但其心脏结构及功能与人高度保守。同时，由于斑马鱼具有透明易观察等优点，开始被大量应用于心血管疾病研究和药物心血管毒性评价当中。维拉帕米能阻滞心肌细胞慢通道，抑制Ca2+向细胞的内流，阻碍心脏慢反应电活动，降低舒张期去极化速度，抑制窦房结的自律性，减慢心率；亦能延长房室结的有效不应期，减慢房室传导。用解剖显微镜下观察斑马鱼心率，模型对照组斑马鱼心率较正常斑马鱼明显减慢。斑马鱼模型评价多发性硬化疗愈药物筛选功效。药物的量效关系实验报价

斑马鱼评价胃肠道粘膜损伤辅助保护功效。多肽药物的安全性评估

利用斑马鱼模型评价生殖毒性。斑马鱼成鱼体长5cm左右，其胚胎透明，在受精72h后完成孵化，并在孵出后3个月内性成熟。成年斑马鱼的繁殖周期短(一般7d左右)，若条件适宜，成年雌性斑马鱼可定期产卵(每次200～300个)。在斑马鱼的早期胚胎及幼体的发育过程中，尚无性别分化，原始性腺都是相同的且具有双向发育的潜能，易受环境(温度、光照、pH值等)因素的影响而改变其遗传性别。对于雌性斑马鱼而言，产卵量是评价其繁殖力的常用生物指标，它与鱼类繁殖过程中的多个环节（卵子发育、雌雄交配行为等）相关，并对环境化学物质具有高敏感性，能直接反应鱼类繁殖力变化。环境化学物质除了直接对亲代斑马鱼的生殖系统造成损害，还可能对其子代的正常生长发育多肽药物的安全性评估

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