河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶

时间:2024年11月13日 来源:

genvois的OpeRATOR 是一种内切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽键的水解。内切蛋白酶具有高特异性,可消化丝氨酸或苏氨酸残基的O-聚糖N端的蛋白质。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖,并且该酶不会用 N-连接聚糖消化糖蛋白。该酶对具有亚洲化he心1 O-聚糖的位点z活跃。它还消化唾液酸化的he心 1 和he心 3,但程度要低得多。为了获得z佳性能,需要去除唾液酸,因此,SialEXO冻干(唾液酸酶混合物)包含在购买中。 GalactEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 2000 单位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-连接的半乳糖。河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶

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糖蛋白性能测试:O-聚糖的岩藻糖基化参与功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和刘易斯结构。分析用这种复杂的聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶工具。我们在许多糖基工程TNFR蛋白上测试了Genovis的FucosEXO,这些蛋白携带多达11个O-聚糖,这些O-聚糖以不同的键装饰。我们将该活性与其他市售岩藻苷酶进行了比较。FucosEXO 能够在 1 小时内对所有三种 TNFR 蛋白进行去岩藻糖磺酸处理,而用其他岩藻糖酶处理导致部分去除岩藻糖或根本没有去除。天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发GalactEXO微离心柱经过格式化,可在30-60分钟内水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。

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为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力,用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖,以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时,西妥昔单抗的所有N-聚糖(包括Fab-聚糖)在PNGase F固定化10分钟内完全去除,PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下,PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件,将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化,分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。

在抗体药物及核酸药物领域,倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程,主要用——RNA转染试剂、生物活性物质纯化分离用填料产品、ADC的payload抗体(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、动物造模用阳性及阴性抗体、泊洛沙姆P 188 Bio、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德国BASF、美国QED、中国君研生物、中国金传生物、中国毫厘科技、中国再帆生物等。这些国产品牌都具有国内自研、自产能力,批次生产稳定可靠、品质可控,为行业发展提供更多国产选择。GalNAcEXO 在 pH 值 6.0 至 7.6 范围内具有高度活性,来源于Akkermansia muciniphila。

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Genovis的SialEXO Immobilized是一种微离心柱,用于在室温下孵育30分钟后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。为了研究依那西普的潜在电荷变体,开发了一种使用SialEXO固定化柱对糖蛋白进行去唾液酸化的一般工作流程。毛细管电泳通常用于在生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体。使用SialEXO Imfixedized对糖蛋白进行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等电聚焦中进行分析。综合起来,该分析工作流程改进了糖蛋白的分离并实现了电荷异构体分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,将很难分析,但使用SialEXO固定化分离峰可以获得。GalactEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila,并在大肠杆菌中表达。天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发

FucosEXO 在1小时内对所有三种 TNFR 蛋白去岩藻糖磺酸处理。河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶

Fc N-聚糖在抗体的效应功能中起着至关重要的作用,但可能会增加蛋白质表征测定的复杂性。在天然条件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游离N-糖以及去糖基化抗体的功能和结构。 为了证明PNGase F固定化和PNGase F冻干在天然反应条件下有效去除Fc N-聚糖,对zhiliao性抗体曲妥珠单抗进行了处理。图2中的质量数偏移表明,在37°C下用Genovis的PNGase F冻干或PNGase F固定化孵育1小时后,曲妥珠单抗上的Fc N-聚糖成功去除,与在溶液中用PNGase F冻干处理的样品相比,没有酶干扰用PNGase F固定处理的样品的分析。河北高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶

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