甘肃用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

Genvis测试去除唾液酸以揭示电荷变体：唾液酸是带负电荷的糖残基，存在于 N- 和 O-连接的聚糖上。唾液酸的固有电荷可能会使分析工作流程复杂化，从而掩盖其他重要的修饰。Microspin 色谱柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. 样品中不含酶。因此，唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。该应用展示了一种快速简便的样品制备方法，可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。GalNAcEXO冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在2000单位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc残基。甘肃用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

用于水解β1-3,4-连接半乳糖的固定化酶在离心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的水解，而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. z终样品中不含酶。GalactEXO 酶来源于 Akkermansia muciniphila 并重组表达，可有效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖。GalactEXO微离心柱经过格式化，可在30-60分钟内水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。海南固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物药物开发对天然糖蛋白或游离的聚糖结构上存在的 N- 和 O-连接聚糖均具有活性。

Genovis的SialEXO产品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。这些酶对天然糖蛋白或游离的聚糖结构上存在的 N- 和 O-连接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前预处理O-糖基化蛋白。其他应用包括降低样品复杂性、电荷异构体分析和外切糖苷酶阵列。N-连接、O-连接和游离聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸，增强对蛋白质电荷变体的分析可固定在即用型离心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白，并通过中级质谱分析。我们将该工作流程应用于依那西普的分析，虽然未经处理的TNFR结构域过于复杂而无法分析，但O-聚糖组成可以在用PNGase F处理后进行分离和比较。

Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化区域O-聚糖位点的覆盖率（图3）。使用OpeRATOR鉴定对应于所有13个O-聚糖位点的肽，而使用ImpaRATOR只能明确鉴定10个位点。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具选择性的氨基酸序列偏好，此处由 S186 和 T245 位点缺乏消化来表明。此外，ImpaRATOR 在两个相邻的 O-糖基化氨基酸之间显示出有限的裂解，如 S213 位点酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位点酶解肽的低强度所证明的那样。在OpeRATOR酶解样品（T184-S199和T200-H204;图2b和d），而在ImpaRATOR消化的样品中，具有漏裂的相应肽（S184-H204）的强度更高。 虽然OpeRATOR显示出更高的O-聚糖位点覆盖率，但使用ImpaRATOR进行消化可以表征O-聚糖结构，包括唾液酸化物种。例如，条形图插入显示了两种糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖种类。这应该与使用OpeRATOR的消化进行比较，在OpeRATOR中，必须去除唾液酸才能产生酶活性，这意味着有关唾液酸化的信息丢失。总而言之，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。OpeRATOR 来源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表达。大肠杆菌。该酶含有 His 标签，分子量为 42 kDa。

Genovis 是一家瑞典生物技术公司，自2010年起，为生物制药公司提供SmartEnzymes 工具酶。Genovis提供一系列独特、快速且易于使用的酶学工具，主要用于生物制药行业和学术界。 我们在全球范围内提供创新的智能酶SmartEnzymes™，用于单克隆抗体、ADC、生物仿制药和双特异性生物药物的开发、生产和质量控制。您可以在我们的网站上“Application页面”获得更多应用信息，如果您有兴趣，可以和我们一起做一个“SmartStories”，也可以联系我们。 与丝氨酸或苏氨酸连接的 GalNAc（称为 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解。云南高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

应用：降低样品复杂性、电荷异构体分析和外切糖苷酶阵列。甘肃用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

Genovis的ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖：依那西普是一种融合蛋白，由TNF受体的胞外结构域与人IgG1的Fc部分相连。该蛋白质在Fc区域上方含有多达13个O-糖基化的Ser/Thr残基簇，使其成为一种非常难以在结构上表征的生物制药。为了证明ImpaRATOR的聚糖特异性，制备了三种具有不同聚糖组成的依那西普样品：（i）携带单唾液酸和二唾液酸化he心1结构混合物的未经处理的糖蛋白，（ii）用SialEXO处理的糖蛋白去除唾液酸并产生裸核1结构，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO处理的糖蛋白产生单个GalNAc残基， 也称为Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一锅反应中处理三个样品（图1）。作为比较，SialEXO处理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR处理。将所得肽还原、烷基化并用HILIC-MS进行分析。FabRICATOR被包括在反应中，以将Fc区与大多数C端糖肽分离，以促进其表征。甘肃用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究