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由于细胞可以在体内以依赖 NEO1 的方式同时遇到 RGM 和 NET1,作者探究细胞表面是否存在稳定的三元NEO1-NET1-RGM复合物,或者NET1和RGM是否会竞争结合NEO1。为了探究这两种区别,作者采用Proximity Ligation Assay(PLA)实验,将经过细胞表达并纯化的全长的NEO1与NETNTR以及全长的胞外RGMB进行相互培养,观察到遇到PLA现象,并且只有当NET1与RGMB非常接近且距离<40nm时才会产生。当RGMB突变为不可链接NET1时,PLA现象明显减少。结果表明,NEO1是连接NET1和RGMB所必需的,并且会在细胞表面形成三元复合物。重庆有登记号蔗糖八硫酸酯钾医院采购
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