南京支原体检测方法等温扩增

时间：2024年08月06日来源：

LAMP法，即环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification），是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。它由日本学者Notomi于2000年开发。LAMP法检测有以下特性：

快速高效：LAMP技术可以在1小时内把几拷贝的目的序列迅速扩增到10^9^～10^10^拷贝，扩增效率高。

简便性：LAMP技术不需要进行模板的预变性，减少了PCR技术升降温带来的影响以及对昂贵、精密实验仪器的要求，同时扩增效率高，可以在较短时间内完成检测。

LAMP法因其快速、高效、特异、灵敏和经济等优点，已经应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和转基因产品检测等领域，并且还将广泛应用于临床诊断、环境监测、食源安全等领域，具有更为广阔的发展应用前景。

细胞培养过程中支原体污染怎么预防？南京支原体检测方法等温扩增

方法	灵敏度	优势	劣势
培养法	☆☆☆	ü 便捷 ü 便宜 ü 金标准	ü 费劳力 ü 耗时长 ü 需要特定的培养基 ü 特定支原体种类需要特定的培养基
DNA染色 (DAPI or Hoescht)	☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 可能难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属 ü 可能假阳性可能性
间接染色	☆☆☆	ü 迅速 ü 便宜 ü 易检测	ü 费时 ü 需要细胞系指示
ELISA	☆☆	ü 迅速 ü 客观，易判读结果 ü 可以鉴别支原体种属	ü 受抗体限制 ü 价格高
免疫染色	☆☆	ü 迅速 ü 可检测支原体种属 ü 价格略高	ü 可检测的支原体种属有限
放射自显影	☆☆	ü 迅速	ü 难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属 ü 费劳力
生物发光	☆☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属
PCR	☆☆☆	ü 便宜 ü 迅速 ü 具有特异性	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性 ü 需要提取DNA
Real-Time PCR	☆☆☆	ü 便捷 ü 迅速 ü 具有特异性 ü 结果可靠 ü 高通量	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性 ü 需要提取DNA
LAMP	☆☆	ü 便捷 ü 无需DNA提取 ü *需10min左右的实验操作时间 ü 具有特异性 ü 高通量	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性深圳支原体检测服务为什么要去除支原体？

细胞培养中，需要去除支原体的污染：支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一，细胞库中或正在使用的细胞中，支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响：

01/ 争夺营养 – 阻碍细胞生长和增殖

02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平

03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态

04/ 损害膜和细胞器

05/ 导致突变和染色体变化

06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失，耽误研究时间

07/ 实验结果的不可靠性，实验结果的重复性降低

08/ 生物安全问题

支原体污染一旦发生，不仅对细胞培养造成严重影响，甚至可能导致实验结果失真。而且支原体污染在细胞培养实验中相当常见。因此，预防措施是确保细胞培养环境和实验结果可靠性的重要手段。

01/ 良好的无菌技术及实验操作，保证操作不会引入新的污染

02/ 保持实验空间的清洁

03/ 确保从可靠的来源获取细胞，减少不同细胞之间的交叉传染

04/ 防止交叉污染

05/ 减少气溶胶生成

06/ 谨慎使用抗*素

07/ 定期支原体筛查

08/ 丢弃或处理受到支原体污染的细胞

09/ 保持良好的记录

细胞培养为什么建议使用支原体检测？

根据提供的信息，支原体去除试剂是一种混合制剂，通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果，同时对细胞无伤害。它被设计为对细胞毒性小，不影响后续的细胞实验，包括细胞活力检测和细胞转染等。这表明使用支原体去除试剂去除支原体后，理论上不应该对细胞的转染效率产生负面影响。

此外，支原体污染本身会对细胞的转染效率产生负面影响。研究表明，与未污染的细胞相比，支原体污染的细胞转染后具有较低的基因表达水平。因此，去除支原体后，可以预期细胞的转染效率会得到改善，因为移除了影响细胞正常功能的污染物。

支原体去除试剂会影响细胞的生长状态嘛？上海细胞支原体检测试剂价格

细胞培养支原体污染怎么检测？南京支原体检测方法等温扩增

支原体是细胞外生存的小微生物，是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝形、分枝状等多种态。

1、支原体存在于我们周围，他可能就如尘埃一样存在于我们的环境中

2、可透过一般的滤膜，所以不要寄希望于过滤可以清楚支原体污染的液体

支原体对培养细胞的污染发生率高，据估计平均发生率在60%左右。同时又非常隐秘，早期不容易被发现，除非用特异性和灵敏度都非常高的检测试剂盒。支原体因为个头小，能穿过0.22微米滤器，并且在实验室内会潜在的扩散。支原体污染使得用被污染的细胞样本做的实验完全失去意义和价值。

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