支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一，细胞库中或正在使用的细胞中，支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响：
01/ 争夺营养：支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖
02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态
04/ 损害膜和细胞器
05/ 导致突变和染色体变化
06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失：支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失
07/ 实验结果的不可靠性
08/ 生物安全问题
支原体去除之后对细胞检测有无影响？杭州细胞培养支原体去除试剂价格
目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中，其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样，主要来源包括实验室人员、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外，来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂；非无菌供应品、培养基和溶液；实验室人员；培养箱；液氮；空气颗粒和气溶胶；抗*素的过度使用；细胞培养器皿的不正确密封；以及其他的支原体细胞培养物等都可能成为支原体的传播途径。
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在科研中，支原体检测是确保细胞培养纯净性的重要环节。以下是一些在科研中常见的支原体检测方法：
1. 支原体培养法：这是一种传统的检测方法，通过将细胞培养物接种到特定的培养基中，观察是否有支原体生长。这是直接的检测方法，但耗时较长，通常需要数周时间。
2. DNA染色法：使用荧光染料（如Hoechst或DAPI）染色细胞核，然后通过荧光显微镜观察。这种方法操作简便，可以快速得到结果，但特异性不高，可能会有假阳性。
3. 聚合酶链反应（PCR）法：这是一种分子生物学技术，通过设计特异性的引物，扩增支原体DNA，从而检测支原体的存在。PCR法具有高灵敏度和特异性，已成为日常细胞培养维护的可靠方法。
4. 核酸扩增技术（NAT）：NAT技术通过扩增并检测特定的支原体基因组保守序列来进行支原体污染检测，具有快速、简便的特点。
支原体检测实验方法需要考虑以下几个关键点：
1. 样本的采集与处理：确保样本的采集和处理过程符合无菌操作规范，避免交叉污染。
2. 实验操作的标准化：制定详细的实验操作流程，包括样本接种、培养条件、观察时间点等，以保证实验的可重复性和准确性。
3. 使用适当的培养基：根据支原体的特性选择合适的培养基，如支原体肉汤4. 培养基、精氨酸支原体肉汤培养基等，并确保培养基的灵敏度和特异性。
5. 设置对照组：实验中应包括阳性对照和阴性对照，以验证实验方法的有效性和排除假阳性或假阴性结果。
支原体污染之后是直接丢弃还是重新培养？
需要定期检测支原体污染的客户主要包括以下几类：
1. 生物医药企业：生产涉及细胞培养的生物制品的公司，包括疫苗、生物药物、基因产品等。
2. 细胞公司：进行细胞产品的研发和生产的企业，需要确保所用细胞的安全性和有效性。
3. 科研机构：从事细胞生物学、分子生物学、遗传学等研究的学术机构，需要保证实验结果的准确性。
4. 临床单位：使用细胞技术进行的医院或诊所，需要确保用细胞的质量。
5. 细胞库：保存和供应细胞株的细胞库，需要对细胞资源进行定期检测以保证其无污染。
6. 生物技术公司：提供生物技术服务的公司，如细胞培养、基因编辑等，需要确保服务过程中细胞的质量。
支原体检测的应用场景？细胞培养支原体预防试剂
细胞培养支原体污染怎么去除？杭州细胞培养支原体去除试剂价格
检测新鲜培养基是否有支原体污染，可以采用以下五种方案：
1. 培养法：这是一种传统且可靠的方法，通过将培养基接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上，观察是否有支原体生长。这种方法较为耗时，但成本较低。
2. 荧光染色法：使用特定的荧光染料（如Hoechst 33258）对细胞进行染色，然后在荧光显微镜下观察。如果存在支原体污染，可以看到细胞表面或细胞间隙中支原体DNA的荧光染色。
3. PCR法：通过设计针对支原体特定序列的引物，利用PCR技术特异性扩增目标DNA。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，如果出现条带则表明存在支原体污染。
4. 电镜观察法：使用电子显微镜直接观察培养细胞中的支原体污染情况。这种方法可以提供直观的支原体形态信息，但设备要求较高。
5. 一步法恒温支原体检测：使用特定的试剂盒，如Yeasen一步法恒温支原体检测试剂，采用等温扩增技术，通过颜色变化（由蓝紫色变为天蓝色）进行快速检测。
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