云南动物组织免疫组化

免疫组化实验流程介绍：

英瀚斯生物为您整理总结免疫组化详细步骤：

1、SP三步法

1）石蜡切片，常规脱蜡至水。

2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。

3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟

4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.

5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。

6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（比较好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。

7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。

8）PBS冲洗，3分钟×5次。

9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。

10）PBS冲洗，3分钟×5次。

11）显色剂显色（DAB等）。

12）自来水充分冲洗。

13）可进行复染，脱水，透明。

14）选择适当的封片剂封片。 常见的免疫组化方法有哪些？云南动物组织免疫组化

免疫组化的结果分析：

免疫组化实验通常需要设置阳性对照、阴性对照（或替代对照）（阳性对照是排除方法和实验系统有无问题；阴性对照与替代对照是排除有无非特异性染色）。一般情况下，阳性对照颜色的特点为：Ag定位，包浆、胞核、胞膜、间质具有结构性。且染色的强度不同（颜色深浅不一）；阴性对照的特点为：染色细胞与组织无区别，颜色具有弥散性，分布均匀。

英瀚斯生物可承接各类病理染色，包括免疫组化。

说明：免疫组化实验可以对结果进行定量分析，但要实验得到的必须是高质量的染色切片，要求背景染色浅且特异性染色较深，这样分析的结果才会比较准确。 靠谱免疫组化外包免疫组化样本如何处理？

确定来源不明的转移瘤的原发部位，临床上免疫组化也可以进行操作。对于来源不明的转移瘤，用免疫组化技术有助于确定恶性cancer的组织学来源，进一步确定原发部位。如角蛋白抗体(CK20)在胃肠道cancer、胆管cancer、胰腺cancer中阳性，而在肺cancer、乳腺cancer、肾cancer中阴性;Tg阳性可考虑甲状腺转移;波形蛋白(Vimentin)阳性支持肉瘤的诊断;前列腺特异性抗原(PSA)阳性可考虑前列腺转移;甲状腺球蛋白阳性可考虑甲状腺滤泡细胞cancer;肌动蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、结蛋白(Desmin)、肌红蛋白(Myoglobin)阳性可考虑横纹肌肉瘤;S-100蛋白阳性支持黑色素瘤的诊断;等等这些都为cancer的医疗及预后提供了依据。

免疫组化中免疫胶体金技术，英瀚斯生物小编为您说明介绍。免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。哪里可以做免疫组化？

免疫组化染色切片的好坏直接影响着病理医生对其染色结果的判断，进而影响病理诊断，所以制作一张良好的免疫组化切片至关重要，它需要病理医生与病理技师两者间的相互协调，密切配合和共同努力，病理医生选择抗体，设置对照，判读结果，指导技术;而技术人员进行实验操作，保证染色质量。在免疫组化切片的制作过程存在多个环节，每一环节的失误都可能影响检测结果，如抗原保存，蛋白酶消化，增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度等等，因此制作一张高质量的免疫组织化学切片是多方面相互配合的结果。英瀚斯生物，专业病理染色切片平台，免疫组化效果好！云南细胞免疫组化价格

英瀚斯生物为您详解免疫组化实验指南！云南动物组织免疫组化

免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些？

1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索比较好浓度。

2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合；建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是比较好的时间和次数。若不行，还可高压修复。

3、组织切片本身这种抗原含量低。

4、血清封闭时间过长。

5、DAB孵育时间过短。

6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。

7、开始做免疫组化，建议一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等问题。 云南动物组织免疫组化