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PCR的假阳性主要原因之一出现非特异性扩增带：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法（93℃变性，65℃左右退火与延伸）。PCR的假阳性主要原因之一出现片状拖带或涂抹带：PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓度。增加模板量，减少循环次数。英瀚斯分子生物学检测平台，信得过的pcr检测。组织pcr要多久
PCR引物设计的原则PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。（1）引物设计的基本原则引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC比较好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。引物内部不应出现互补序列。两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3′端的互补重叠。引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。引物3‘端的碱基，特别是较末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，比较好选择是G和C。引物的5′端可以修饰。如附加限制酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。贵州细胞pcr哪家好pcr检测实验数据如何分析？
PCR实验技术中的锚定PCR（AnchoredPCR）介绍：锚定PCR主要用于分析具有可变末端的DNA序列，Loh等用A-PCR对人外周血淋巴细胞T细胞受体α-链的mRNA的多变性进行了分析。先合成cDNA，并用末端脱氧核苷酸转移酶在其3’-可变区末端加上一个PolyG尾巴。Loh等恒定区与可变区连接部位设一个引物，另一个引物是一个具5’-polyG尾巴的引物。带有PolyG尾巴的引物是一个固定点，它可以并与PolyG尾巴结合，无论其余部分序列如何，只识别片段末端，利用此法可从前述mRNA中检出至少20种不同序列，每一种都是独特的，表明A-PCR不对任何特殊序列有倾向性结果，可用于T细胞及其它部位抗体基因的研究。
PCR的特异性影响因素有很多，在此我们作一归纳，供大家参考：①退火步骤的严格性：提高退火温度可以减少不匹配的杂交，从而提高特异性。②减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。③引物二聚体是较常见的副产品，降低引物及酶的浓度也可以减少错误引发，尤其是引物的二聚化。④改变mgcl2(有时kcl)浓度可以改进特异性，这可能是提高反应严格性或者对taq酶的直接作用。一般认为PCR产物应在48h以内完成电泳检测，有些比较好于当日电泳检测，大于48h后带型就会出现不规则，甚至消失。荧光定量pcr正常值多少？
PCR的临床应用主要用于针对疾病遗传病等。PCR在医学检验学中**有价值的应用领域就是对疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。一般实验室也能检出10~100基因拷贝，而目前病原体抗原检测方法一般需要105-7个病原体才可检测到。PCR对病原体的检测解决了免疫学检测的“窗口期”问题，可判断疾病是否处于隐性或亚临床状态。定量PCR研究资料已表明，病原体数量与疾病病情的轻重程度、传染性及针对效果均有相关性。许多研究表明，人类免疫缺陷病毒(HIV)后，潜伏期长短和临床症状轻重与血液中的病毒量相关；也有研究表明，HIV病毒载量低于一定值时，没有传染性。在乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒定量研究中发现，病毒的数量与某些药物的疗效相关。例如，干扰素针对对肝炎病毒高拷贝者不敏感，低拷贝者敏感；而有些药物则具有***降低病毒高拷贝的作用。如何挑选pcr检测试剂盒？贵州pcr是什么意思
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PCR实验技术中的直接PCR（DirectPCR）介绍：直接PCR意指直接从样本中扩增目的DNA，而无需核酸纯化。直接PCR中，在高温变性阶段，诸如细胞、组织等材料在独特的缓冲液中裂解，释放出DNA。因此这种方法简化了PCR实验流程，减少了动手操作的时间，同时可避免纯化步骤中DNA的损失。推荐具有高合成能力的DNA聚合酶用于直接PCR扩增。细胞碎片、蛋白、脂质和多糖也随DNA释放到裂解液中，它们会抑制PCR反应。具有高合成能力的DNA聚合酶可以耐受这些抑制剂，从而使直接PCR成为可能。具有高合成能力的聚合酶通常具有更高灵敏度，因此可从未纯化样本中扩增微量的DNA。组织pcr要多久
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