宁夏大鼠免疫组化怎么选择

免疫组化在在病理诊断中，随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现，免疫组化在cancer诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。由于免疫组化技术也存在一些局限性，因此，深入研究免疫组化原理和技术，并努力实现规范化的操作，才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床医疗中的作用。

观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况，对抗原进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学，由于抗原与抗体特异性结合，因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂(酶、荧光素、同位素、金属离子等等)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)。IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本，其中制作组织标本更常用、更基本的方法是石蜡切片。石蜡切片对于组织形态保存好，有利于各种染色对照观察，而且能长期保存;石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中优先选择的组织标本制作方法。 免疫组化怎么做？步骤方法？宁夏大鼠免疫组化怎么选择

病理医师日常工作中经常说的一句话应该就是“做个免疫组化吧”；不管是临床医师，还是患者，他们问的多的问题则是“为什么要做免疫组化？”病理医师通过“特殊染色”来进行细胞的识别。这一做法的依据是特定细胞和组织中的成分不同、则化学性质不同，通过染色的方法则可以呈现不同颜色。不过，由于组织固定或储存等，会造成相应物质的活性降低甚至消失，因而限制了特殊染色方法的应用。随着免疫学研究的进展，根据抗原与相应抗体间特异性结合的性质，则有了现在免疫组化的方法：不同细胞、不同组织中抗原有一定差异，抗体与被测组织中的特定抗原结合，进而通过一定显色方法将结合的抗体显示出来。如有相应显色，则证实可能有被测抗原；无显色则可能无被测抗原。当然，这一方法中需注意相应的“例外”，如抗体的非特异性结合、非特异性显色，则容易造成“假阳性”；或者虽有相关抗原、但所用抗体与该抗原并未结合等，则容易造成“假阴性”。随着免疫组化的应用经验的增加，这些问题在常规应用中尽量得以避免，前者如各种显色方法的优化；后者如抗原修复方法的优化、新型抗体开发及选择。免疫组化英瀚斯生物，专业病理染色切片平台，免疫组化效果好！

免疫组化实验注意事项总结：

Ø本实验室所用切片一般是石蜡切片。

Ø烘片：使蜡片水分蒸发，石蜡软化，组织切片牢固贴在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差异。

Ø抗原修复时，使片子始终浸没在修复液中，液体不能干。

Ø一抗孵育在37度培养箱，湿盒放置1h，省时间和结合效果好，不要超过1h，容易过染。

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Ø二抗使用：两个二抗放大信号或一个二抗；若抗体信号强，可不用放大信号，尽量增大信噪比。

Ø10XDAB在常温溶解，尽可能现用现配，放于4度储存时间久了效果不佳。

Ø复水和脱水时所用的梯度酒精不可混用，要区分开。

Ø加抗体和显色液时，都要将片子甩干，在半干半湿的状态下再加，不然容易造成溶液的二次稀释。

Ø整个操作过程中在显色之前，一定不能干片。

免疫组化临床应用对“未分化”cancer的分类。未分化cancer包括cancer或肉瘤，在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer细胞的起源特征不能分类，初步区分组织学类型用非特异性抗体，在其基础上再选用特异性抗体做进一步鉴定。如分化差的cancer可显示Vimentin或S-100蛋白，有时淋巴瘤可以表达上皮膜抗原，一些黑色素瘤表现出角蛋白，这同时也强调了在cancer诊断中应使用一组抗体而不是单个抗体。如果您有实验外包的需求，可以与我们南京英瀚斯生物进行联系，我们也有做免疫组化的服务！免疫组化protocol，详情请看英瀚斯生物官网。

免疫组化实验流程介绍：

英瀚斯生物为您整理总结免疫组化详细步骤：

1、SP三步法

1）石蜡切片，常规脱蜡至水。

2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物酶活性。

3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟

4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.

5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。

6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（比较好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。

7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。

8）PBS冲洗，3分钟×5次。

9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。

10）PBS冲洗，3分钟×5次。

11）显色剂显色（DAB等）。

12）自来水充分冲洗。

13）可进行复染，脱水，透明。

14）选择适当的封片剂封片。 免疫组化技术的原理、分类和优点！湖北组织免疫组化多少钱

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免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性，无阳性信号，假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当，根据不同的抗原特点采用不同的修复方法，大多数抗体要求热修复，热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化，如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊，进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照，比较两者染色结果。若阳性对照有表达，表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题;若阳性对照无表达，则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题，应逐一查找原因。宁夏大鼠免疫组化怎么选择

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