外泌体与细胞共培养

为了解决外泌体实验遇到的上述的各种问题,Wako研发出MagCapture™外泌体提取试剂盒PS（MagCapture™ExosomeIsolationKitPS）提取高纯度细胞外囊泡。外泌体膜含有分泌细胞源的蛋白和脂质，众所周知磷脂酰丝氨酸（PS）在活细胞通过翻转酶作用导向细胞膜内侧，暴露在外泌体膜外侧3）。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通过巨噬细胞进行细胞凋亡的吞噬受体）蛋白通过细胞外域IgV域与含有钙离子的PS结合4）。基于上述知识，我们利用Tim4固化磁珠，在钙离子存在下捕捉培养上清和血清等样品中的外泌体，再添加螯合剂洗脱外泌体，这种外泌体纯化方法是和金泽大学医学系免疫学华山教授共同开发，并取得了成功。5）这是迄今为止取代黄金标准超速离心法的新型外泌体纯化方法。外泌体在心脏修复中起着关键作用。外泌体与细胞共培养

已经有许多关于外泌体作用的报导，根据这些现象实验中，从体液和培养上清中高纯度提取的高纯度外泌体，在活内是否真的能发生作用尚未能确定。确认外泌体生理作用的单独方法就是明确外泌体的释放机制，通过促进或压制释放机制，分析会引起何种生理作用，这是进一步研究的发展方向。甚至活内的外泌体动态（哪个外泌体迁移至何处）也会成为今后需要努力研究的重要课题。实际上，用PS亲和法提取的人白血病细胞释放的外泌体，其纯度与超离心法和PEG沉淀法提取外泌体做比较，PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上，几乎没有混入外泌体以外的蛋白，回收量高，操作重复性好。外泌体发展趋势几乎没有混入外泌体以外的蛋白，回收量高，操作重复性好。

瘤释放的外泌体可以通过削弱免疫效应细胞的反应和激发免疫抑制细胞的扩增，来营造一个免疫抑制的环境。瘤释放的外泌体可以替代瘤细胞接受免疫系统的攻击，从而帮助瘤细胞逃过免疫系统的识别。瘤释放的外泌体可以引发炎症，利用基质浸润细胞的反应营造出利于瘤生长的微环境。研究表明，在过去短短的5年里，对外泌体的研究已经取得了比较好的的进展。如今，收集并分析瘤释放的外泌体已经成为液体活检的一个重要研发方向。靶向瘤释放外泌体的治理策略将对改善病症患者的命运发挥出举足轻重的影响。

外泌体富含蛋白质、脂质和核酸分子，这些分子具有来源细胞的特异性，所以通过分析中流细胞所释放的外泌体分子特征就可部分反映其来源细胞表型及其生物学作用。现已发现多种中流外泌体来源的蛋白类分子标志物。例如，乳腺ai、结肠ai和胰腺ai中均可检测到磷脂酰肌醇蛋白聚糖1（glypican1，GPC1）的表达，且与乳腺ai和结肠ai相比，GPC1对胰腺ai的早期诊断尤具价值。前列腺ai患者血浆外泌体中凋亡抑制蛋白的表达增高则提示与中流进展相关。随着蛋白组学技术的发展，研究发现中流患者血液外泌体来源的蛋白标志物其诊断特异性和敏感性分别可达到95％和90％。人体内多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，包括干细胞、免疫细胞、内皮细胞、及平滑肌细胞等。

外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200nm，形态也呈现出多样性。长链非编码RNA（longnon-codingRNA）是一类转录本长度超过200nt、不编码蛋白的RNA。近年来的研究表明lncRNA能在标贯遗传、转录及转录后水平上调控基因表达，参与了X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录jihuo、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程，与人类疾病的发生、发展和防治都有着密切联系。lncRNA芯片对lncRNA进行功能研究也被更多的关注，通过设计不同的lncRNA探针，可以更加快速、高通量地筛选出疾病或特定生物学过程中差异表达的lncRNA和mRNA信息，找到lncRNA的靶基因位点深入分析调控机制。外泌体的复杂性，为疾病检测和监测提供了一个多指标的诊断窗口。血清外泌体提取试剂盒

抗体亲和法和密度梯度离心法，虽然可以提取到高纯度的外泌体，但不能提取完整外泌体。外泌体与细胞共培养

在免疫系统中，淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞等均可以产生外泌体。研究表明免疫细胞来源的外泌体能够明显影响机体的免疫调节机制，包括调节抗原呈递、免疫激huo、免疫监督等。不同免疫细胞来源的外泌体功能不同，以树突状细胞(该细胞具有免疫刺激能力，是目前能够激huo初始T细胞的抗原递呈细胞)来源的外泌体为例，其外泌体的免疫刺激作用取决于来源细胞的成熟状态。成熟的树突状细胞外泌体内包含能够直接激huoT细胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ，共刺激分子如CD40、CD8、CD86和热激蛋白，这些分子使树突状细胞来源的外泌体具有抗原呈递、调节免疫响应的生物功能。外泌体与细胞共培养