提取血浆外泌体的流程

流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌体定量检测的准确性也在不断上升。将外泌体表面特异性标志物CD63、CD81等相应抗体进行标记，可用流式细胞仪检测到阳性表达，从而实现对外泌体的定量。但流式细胞技术检测时需要单颗粒悬浮液，当外泌体浓度高或分离过程中发生外泌体囊泡聚集时将导致一次观察到多个颗粒，从而导致数据不准确。因此，为了通过流式细胞仪观察，需要将外泌体通过免疫捕获或共价结合固定在磁珠表面上，从而便于将外泌体囊泡暴露于已知或者预期在外泌体表面表达的抗原的荧光偶联抗体中。在流式细胞术之前，可在落射荧光显微镜（EPI）下观察与磁珠和荧光抗体偶联的外泌体囊泡。当样品通过流式细胞仪时采集荧光信号，不只可以对外泌体进行高通量分析，还可以基于抗原表达对外泌体进行定量或分类。外泌体在免疫调控、肉瘤转移和血管生成以及生物标志物等领域发挥着非常重要的作用。提取血浆外泌体的流程

科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。例如，类风湿关节炎患者的滑膜成纤维细胞所释放的外泌体，高浓度集聚诱导细胞死亡的TNF-α，可使类风湿关节炎恶化。通过上述介绍可以知道症状细胞来源的外泌体含有与症状进展相关的分子，神经细胞来源的外泌体含有与神经退行性疾病相关的分子，因此，通过压制或去除这些外泌体，有希望压制疾病发生。随着今后的研究发展，外泌体功能逐步清晰，并扩大临床应用，有望将外泌体应用在各种疾病医治上。甚至可尝试利用外泌体将siRNA和抗药剂等运输到目标细胞中。外泌体仪器价格人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。

在外泌体中引入药物的方式包括体内装载和体外装载两种。体内药物装载可以通过传统方法(如病毒转染、脂质体转染或电穿孔等)转染来源细胞，编码感兴趣的RNA或蛋白质，也可以使药物与来源细胞共混，使细胞分泌产生含有目标生物分子的外泌体。体外药物装载则首先需要得到纯化的外泌体，然后将感兴趣的药物通过电穿孔或脂质体转染等方法装入纯化的外泌体。外泌体内可装载的药物包括小分子化学药物、蛋白质和多肽、核酸药物、天然产物等。

外泌体的提取主要包括以下几种方式：1、免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。2、PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。3、色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不普遍。外泌体作为核酸的药物递送载体。

外泌体开始被认为是细胞排出代谢废物的一种方式，能够帮助缺乏高效降解能力或位于排泄系统的细胞排出不必要的蛋白质和RNA。近年来，随着人们对外泌体的深入了解，外泌体的多种生物功能先后被发现。如今外泌体作为一种细胞间交流、传递大量的生物功能分子的重要方式日益受到重视。外泌体与受体细胞的信息交流可能通过以下4种途径实现:(1)外泌体表面膜蛋白质被目的细胞表面的受体识别，从而激huo靶细胞;(2)外泌体在蛋白酶作用下产生的表面膜蛋白质碎片可作为目的细胞表面受体的配体;(3)外泌体脂膜可以与目的细胞膜融合，将蛋白质和RNA等内容物释放进去，此类膜融合可能改变靶细胞的一些膜特性，例如脂质和膜蛋白质的密度及种类;(4)目的细胞通过胞吞的形式摄入外泌体。免疫印迹或蛋白质印迹是分析外泌体较常用的方法之一，其原理是外泌体上特异性抗原与抗体结合。外泌体纯化试剂盒

外泌体复杂的内容物被认为是疾病诊断的无创或微创生物标志物。提取血浆外泌体的流程

近年来，外泌体的捕获技术越来越多，微流体系也被用于外泌体提取，此方法能根据其物理和生化特性同时分离外泌体。采用这种方法获得的样品纯度高，且可及时获取外泌体用于疾病的相关检测。在初次注射时外泌体粘附在微流控设备的内表面，并在随后的PBS注射中冲洗掉。此方法采用的设备复杂，所需的样本量取决于流动通道的长度。另外，样品量的注入速率比较低，因此，对于大样品量，将需要较长的处理时间。外泌体在包括瘤子在内的各种疾病的发病机理中具有重要的功能。目前，研究人员已经开发了多种方法来分离外泌体，离心技术仍然是常用方法，其他方法，例如过滤、磁珠分离和色谱法等，也显示出独特的优势，但目前仍然没有一种公认有效的提取方法，研究人员应针对不同来源的样本以及不同的下游分析选取较适宜的提取方案。提取血浆外泌体的流程

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