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Westem HRP基材。高背景分锁不足更改为不同的阻止解决方案。吸笔架不够湿组装前，先将吸墨纸架弄湿。阻塞解决方案可能有始终准备新鲜的0.5％脱脂/低脂干奶。降级的抗体浓度过高降低抗体的浓度。吸笔架朝上放置将印迹架朝上放在蛋白素框架中。在框架中洗涤不足进行至少4次每次30 mL的洗涤。添加清洗剂时，确保真空连续运行缓冲。整个系统电平不一致的信号确保系统在平坦的水平表面上。污点抗体不均匀补充封闭液和抗体稀释剂遍及整个表面0.1％Tween 20表面活性剂。吸墨纸架使用小量移液器（例如5毫升），慢慢散布整个印迹中的抗体。应用至少2.5 mL（用于MultBlot），5 mL（用于Mini blot）或10 mL（用于Midi印迹）抗体。抗体体积低没有抗体回收盘确保抗体中的孔，回收托盘algn上海益启生物Merck仪器订购方便。崇明区Merck细胞跨膜电阻仪Merck仪器订购
15分钟。图4.扩展孵化（过夜）：SNAP i.d.8 2.0系统与标准免疫检测一种。 SNAP id.o 2.0蛋白检测b。标准系统Midi印迹免疫检测将A431细胞裂解液和大鼠肝裂解液（12至3 ug）转移至Immobilon9-P膜。两种印迹均用在TBST中制备的0.5％NFDM封闭。这SNAP i.d.c 2.0 Midi印迹被阻断20秒，标准印迹为分锁了1个小时。两种印迹均与相同稀释度的MAP激酶1/2（ErK1 / 2），但是，对于HRP偶联的二抗山羊抗兔（AP132P），将SNAP i.d.2.0印迹孵育10分钟在TBST中洗涤3次后，将标准印迹孵育1小时。 图5.扩展孵化（1小时）：，SNAP i.d.o 2.0系统1小时协议与SNAP i.d.9 2.0系统标准协议与标准免宝山区MerckWB实验加速器Merck仪器代理价格关于细胞分析仪的询价电话。
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utiBlot框架用于在MultiBlot框架中进行单点印迹时，放置正确处理一次印迹，然后空白卡在空井。未放入空白卡空井清洁不足确保框架中央的所有系统垫片和阀门均处于院长，无碎屑或盐分。清空真空瓶，然后更换串联的Milx9-FA过滤器。可能由于以下原因堵塞了吸盘座：浓度在补充有缓冲剂的缓冲液中使用0.2-0.5％的干奶脱脂/低脂干0.1％Tweens 20表面活性剂，带有新的污点固定器。牛奶太高不兼容的封闭液使用新的吸盘固定器更换为强力封闭液。吸墨纸架的重复使用吸笔座只供一次性使用。请勿重复使用。低信号或低信号初级和/或次级将抗体浓度增加5到8倍。比标准抗体浓度过低免疫检测上下颠倒标记印迹的蛋白质一侧，并确保该污点检测试剂不敏感更换灵敏度更高的检测试剂，例如足够的Luminata用Forte买细胞计数器就找益启生物。
疫检测对照，茴香霉素处理和PDGF处理的3T3小鼠成纤维细胞裂解液（10-0.63 ug）被转移到Immobilon8-P膜上。印迹被阻止补充有0.5％脱脂奶粉（NFDM）的Tris缓冲盐水含0.1％Tweeno 20表面活性剂（TBST），并用一级抗B-Tubulin进行探测（MAB3408）和次级HRP偶联的山羊蚂蚁（AP1 24P）在上述条件。将印迹暴露于X射线胶片一分钟。维护SNAP i.d.o 2.0系统清理去除协议每次使用时应清洁SNAP i.d.o 2.0系统。清理去除盐碱中的盐或污染物和管道，抽吸真空并通过系统冲洗散去的水。注：请勿对SNAP i.d.9 2.0系统进行高压灭菌。可以拆卸框架，并用中性清洁剂洗涤，然后用蒸馏水彻底冲洗。风干。要拆卸框架，请使用右侧的蓝色夹子调整框架的方上海益启生物微流控细胞芯片分析仪订购方便。崇明区MerckWB实验加速器Merck仪器商家
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关闭真空。同样，溶液将被吸收到印迹架中，并且表面可能看起来干燥。重要提示：孵育10分钟后，再抽真空。11.向下压框架并施加真空。等待5至8秒钟，直到框架完全空了。真空运行连续添加30 mL洗涤缓冲液（对于MultiBlot为15 mL）。重复洗涤步骤3次（共3次）4次洗涤）。12.关闭真空，然后从框架上取下吸墨架。从污点固定器中取出污点，并与适当的检测试剂。如果使用了MultiBlot孔空白，则卸下并清洗。 扩展一级抗体孵育：一小时至过夜1.执行《通用议定书》的步骤1至5。2.加入2.5 mL（对于MultiBlot），5 mL（对于Mini blot）或10 mL（对于Midi blot）1X一抗（浓缩液）通常在标准免疫检测过程中使用）。3.用盖子盖住吸墨纸固定架。如果需要的话，将其从底座崇明区Merck细胞跨膜电阻仪Merck仪器订购