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项卡（图8）创建和启动自定义协议。要手动控制流量，使用“手动模式”标签选择所需的井，压力，和温度（如果使用加热歧管）。有关自动化协议或每次融合的手册，请参阅CellASICO《ONIX2微流体系统用户指南》。注意：对于需要快速交换溶液的实验，请执行以下操作可以应用以下技术：高压（55.2kPa[8psi）下的流量对于初始过渡，然后将流量减小到标准压力长期暴露于6.9-13.8kPa（1-2psi）。 软件操作下图显示了使用ellAsICEONX2软件进行实验的两种模式，请参阅CllASICEONIX2MicrofuidieSystem用户有关软件功能的详细信息的指南。图7.手动模式降低了ONIX2系统的迭代操作。可以手动设置操作参数，此模式a5o提供了选项运行简短的自动印版设置序列，这些序列上海益启生物细胞计数器订购方便。嘉定区Merck细胞计数器Merck仪器代理价格

润湿印迹。，对于大多数应用和大多数抗体而言，0.5％的脱脂/低脂干奶溶液可以提供足够的膜的阻塞。注意：请勿使用浓度高于0. 5％的干奶，因为它可能会导致吸墨纸架堵塞膜。如果使用其他封闭溶液，请参阅表5了解兼容性和推荐浓度。●在洗涤，封闭和抗体缓冲液中始终使用0.1％Tween8 20表面活性剂。这将减少溶液的表面张力，并确保孵育过程中抗体在印迹支架中的均匀分布。●由于SNAP i.d. @ 2.0系统中的免疫检测时间很短，因此建议在开始操作之前应准备一抗和二抗稀释液。●MultiBlot固定器所需的稀释抗体的总体积为2.5 mL，Mini blot固定器为5 mL，10 mL用于Midi印迹固定器。，每次需要洗30次（MultiBlot为15毫升），以确保每次洗完后都能完全清洗印迹孵化步骤。松江区Merck细胞跨膜电阻仪Merck仪器参数上海益启生物细胞分析仪订购方便。

关闭真空。同样，溶液将被吸收到印迹架中，并且表面可能看起来干燥。重要提示：孵育10分钟后，再抽真空。11.向下压框架并施加真空。等待5至8秒钟，直到框架完全空了。真空运行连续添加30 mL洗涤缓冲液（对于MultiBlot为15 mL）。重复洗涤步骤3次（共3次）4次洗涤）。12.关闭真空，然后从框架上取下吸墨架。从污点固定器中取出污点，并与适当的检测试剂。如果使用了MultiBlot孔空白，则卸下并清洗。 扩展一级抗体孵育：一小时至过夜1.执行《通用议定书》的步骤1至5。2.加入2.5 mL（对于MultiBlot），5 mL（对于Mini blot）或10 mL（对于Midi blot）1X一抗（浓缩液）通常在标准免疫检测过程中使用）。3.用盖子盖住吸墨纸固定架。如果需要的话，将其从底座

Westem HRP基材。高背景分锁不足更改为不同的阻止解决方案。吸笔架不够湿组装前，先将吸墨纸架弄湿。阻塞解决方案可能有始终准备新鲜的0.5％脱脂/低脂干奶。降级的抗体浓度过高降低抗体的浓度。吸笔架朝上放置将印迹架朝上放在蛋白素框架中。在框架中洗涤不足进行至少4次每次30 mL的洗涤。添加清洗剂时，确保真空连续运行缓冲。整个系统电平不一致的信号确保系统在平坦的水平表面上。污点抗体不均匀补充封闭液和抗体稀释剂遍及整个表面0.1％Tween 20表面活性剂。吸墨纸架使用小量移液器（例如5毫升），慢慢散布整个印迹中的抗体。应用至少2.5 mL（用于MultBlot），5 mL（用于Mini blot）或10 mL（用于Midi印迹）抗体。抗体体积低没有抗体回收盘确保抗体中的孔，回收托盘algn上海益启生物Merck仪器订购方便。

白的免疫检测：SNAP i.d.“ 2.0系统与SNAP 1.d.系统（首先代）与标准免疫检测一种。 SNAPi.d。 2.0蛋白质检测b。快照蛋白质检测。标准系统Midi印迹系统首先代，单孔免疫检测对照，茴香霉素处理和PDGF处理的3T3小鼠成纤维细胞裂解液（10-0.63 ug）被转移到Immobilon9-P膜上。印迹被阻止含0.5％的非脂肪干mik（NFDM），并在加筋的盐水中制备含0. 1％Tweene 20表面活性剂（TBST），并用主要抗B-Tubulin探测（MAB3408）和次级HRP偶联的山羊蚂蚁（AP1 24P）在上述条件。将印迹暴露于X射线胶片一分钟。图2. erbB2的免疫检测：SNAP i.d.9 2.0系统与SNAP i.d.系统（首先代）与标准免疫检测s。 S上海益启生物微流控细胞芯片分析仪订购方便。虹口区Merck细胞分析仪Merck仪器联系人

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密封的平板/m歧管组件放在倒置显微镜。6.在扩展的灌注实验中，定期将7孔倒空至避免出口溢流到歧管和灌注系统中。在CellASICOONX2软件的“运行”选项卡上，单击“暂停”按钮。按下仪器上或“工具”下拉菜单中的“密封”按钮在下拉菜单中，单击开封板。从板，并抽吸良好。7.将歧管重新密封到板上，然后在在“运行”选项卡上，单击“恢复”以重新启动每个融合协议。解决方案切换1.从选定的进水口（1-5）吸出溶液。加至350μL所需的解决方案。如果少于四个单位（A-D）使用时，用缓冲液填充未使用的进口井，以防只托水。2.根据以下说明将微流体板密封到ONIX2歧管上：CellASIC@ONIX2微流体系统用户指南。3.打开CelIASICOONIX2软件，在下拉列表，然后单击ProtocolEditor选嘉定区Merck细胞计数器Merck仪器代理价格

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