杭州细胞生物学脑定位膜片钳

时间:2023年06月20日 来源:

膜片钳电生理纪录系统及记录方法:细胞膜由双层脂膜组成,具有密封绝缘的特性,因此当纪录 电极接触到细胞膜时电阻会开始上升,然后以人工方式对纪录电极内施加一个负压,可以让电极与胞膜之间吸附得更为紧密而电阻也会加速上升,当纪录电极的电阻达到千兆欧姆(Giga Ω)时,意味着细胞膜与电极之间几乎没有电流漏出,之后对电极内压力施以一个快速的负压将细胞膜吸破,这样纪录电极与细胞胞体之间会形成一个封闭的电容,此时就可以开始对细胞进行实验。膜片钳使用操作注意:在仪器使用以前及使用之后按按照使用时长做好登记工作。杭州细胞生物学脑定位膜片钳

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膜片钳电生理纪录系统及记录方法:膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法,目的在于提供基础研究知识与新药开发时研究细胞电特性或小分子药物对细胞膜上离子信道特性的影响,替开发标靶药物提供一个测试平台。传统的细胞培养膜片钳系统由人工操作,实验人员在取得元代细胞(例如心肌细胞与神经元)后,将研究对象细胞养在玻片上,以手动方式将纪录电极移动放置在胞体上方并压到细胞膜上,此时纪录电极在膜外溶液里的电阻大约为3-9 ΜΩ。福州药理学膜片钳电生理技术应用膜片钳使用的注意事项:在放大器打开时不能用手、金属物品或其它导电的物品接触电极丝。

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膜片钳实验中电极制备的要求:合格的膜片微电极是成功封接细胞膜的基本条件。要成功的封接细胞膜需要两方面的因素保证,一是设法造成干净的细胞膜表面,二是制成合格的电极。首先要选择适当的玻璃毛细管,其材料可使用软质玻璃(苏打玻璃、电石玻璃)或硬质玻璃(硼硅玻璃、铝硅玻璃、石英玻璃)。软玻璃电极常用于作全细胞记录,硬质玻璃因导电率低、噪声小而常用于离子单通道记录。膜片微电极是将玻璃毛细管用电极拉制仪拉制而成的,制作分三步进行:一是分两次拉制;第二步是在电极前端涂以硅酮树脂(sylgard);第三步是抛光。

膜片钳在通道研究中的重要作用:应用膜片钳技术可以直接观察和分辨单离子通道电流及其开闭时程、区分离子通道的离子选择性、同时可发现新的离子通道及亚型,并能在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上进一步计算出细胞膜上的通道数和开放概率,还可以用以研究某些胞内或胞外物质对离子通道开闭及通道电流的影响等。同时用于研究细胞信号的跨膜转导和细胞分泌机制。结合分子克隆和定点突变技术,膜片钳技术可用于离子通道分子结构与生物学功能关系的研究。全自动膜片钳系统技术指标:进行细胞吸附、封接和维持全细胞记录模式。并兼容常规膜片钳放大。

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膜片钳技术的工作原理:膜片钳技术是用于了解离了通道行为的通用型电生理工具,首先用微玻管电极(膜片电极或膜片吸管)接触细胞膜,然后以千兆欧姆以上的阻抗使电极尖锐端与细胞膜封接,通过吸破或者电破的方式使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域与其周围区域在电学上分隔,然后细胞膜破裂,进而对此区域上的离子通道的离子电流进行监测记录的方法。该方法普遍应用于神经细胞,肌纤维细胞,心肌细胞及高表达单一通道的卵母细胞。主要用于监测离子通道在正常或者疾病状态下如何表现,以及不同药物、离子或其他分析物如何改变这些状态。膜片钳技术的建立,对生物科学特别是神经科学是一项具有重大意义的变革。这是一种通过离子通道记录的离子电流来反映细胞膜单一的(或多个)的离子通道活动的技术。该技术的出现将生理学的细胞水平和分子水平联系在一起,又将神经科学的不同亚科融汇在一起,促进了各个学科之间的联系,加速了我们神经科学的研究进展,深入探讨神经活动的机制研究。膜片钳使用操作注意:电热加热线温度很高,在使用时注意避免烫伤。福州药理学膜片钳电生理技术应用

膜片钳技术的应用范围:在神经科学中的研究。杭州细胞生物学脑定位膜片钳

膜片钳实验系统:根据不同的电生理实验要求,可以组建不同的实验系统,但有若干共同的基本部件,包括机械部分(防震工作台、屏蔽罩、仪器设备架)、光学部分(显微镜、视频监视器、单色光系统)、电子部件(膜片钳放大器、刺激器、数据采集的设备、计算机系统)和微操纵器在大多数膜片钳实验,要求所有实验仪器及设备均具有良好的机械稳定性,以使微电极与细胞膜之间的相对运动尽可能小。防震工作台放置倒置显微镜和与之固定连接的微操纵器,其他设备置于台外。屏蔽罩由铜丝网制成,接地以防止周围环境的杂散电场对膜片钳放大器的探头电路的干扰。仪器设备架要靠近工作台,便于测量仪器与光学仪器配接。杭州细胞生物学脑定位膜片钳

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