咨询疾病动物模型建模原理

    技术领域：本发明属于遗传学和生物技术领域，具体涉及pirb基因敲入的小鼠动物模型，还涉及上述小鼠动物模型的构建方法。背景技术：鼠源成对免疫球蛋白样受体b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb，pirb)，是人类免疫球蛋白样受体b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2，lilrb2)的同源基因，pirb基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的7号染色体近端，总大小为，编码841个氨基酸，目前鉴定出15个外显子，外显子1起始密码为atg，外显子15的终止密码子是tga(转录本：)。pirb蛋白属于i型跨膜糖蛋白，包含由六个免疫球蛋白样结构域(domain，d)组成(d1-d6)的胞外段，一个疏水的跨膜段，三个免疫受体酪氨酸依赖的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一个itims样序列组成的胞内段。理论上讲，pirb的分子量约为92kd，但是western-blot分析中，pirb经常位于105kd处，因为pirb是糖蛋白。以往研究发现，pirb在免疫系统和中枢调节中均发挥重要作用。在免疫系统中，pirb在许多造血细胞都有表达，包括b细胞、肥大细胞、巨噬细胞、粒细胞和树突细胞，但是在胸腺细胞、成熟的t细胞和自然杀伤细胞不表达。可以严格控制实验条件，增强实验材料的可比性。咨询疾病动物模型建模原理

1、自发性**动物模型:未经人为处理;自然发生;自发性**的总体评价--动物自发性**的病因往往是由动物的遗传特性决定的与人痒的病因有较大距离。各动物**生长速度差异较大很难在限定时间内获得大量生长均匀的荷瘤动物(tumor-bearinganimals)。因此，自发性**动物模型很少在抗**药物的常规筛选中广泛应用。2、诱发性**动物模型:在实验条件下:使用致*物(carcinogens);诱发动物发生**animalmodelofinducedtumor)指使用致*因素(carcinogens)在实验条件下诱发动物发生**的动物模型，它是进行实验**学研究的常用方法。常用于验证可疑致*因素的作用也越来越多地应用干**发生机理的研究及防治效果的观察上，在**病因学、遗传学、生物学等方面的研究中有重要地位。由于诱发因素和条件可人为控制，诱发率远高于自然发病率故在**实验研究中优于自发瘤。用于诱发实验性**的动物种类很多，它们因种族不同而对相同致*因素有不同的反应性。常用的动物以哺乳动物为主，其中啮齿类动物的使用**多，应用**广，包括各种大鼠、小鼠、际鼠等。。酒精肝疾病动物模型建模优势上海东寰在动物建模方面已经有了多年的技术经验。

    即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于，步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是：本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法，本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。通过pirb敲入动物模型与不同类型cre小鼠的杂交，可以用于研究ad不同***或不同细胞类型pirb的调节作用。附图说明图1为本发明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位点的打靶质粒载体的构建图；图2为本发明pirb基因敲入的小鼠模型的构建方法的流程图；图3为本发明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr结果鉴定电泳图；图4为本发明f1代pirb敲入的小鼠验证pirb基因敲入效果的测序峰图；图5为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的方法示意图；图6为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的结果图。

1、动物模型名称：酒精诱导的肝硬化大鼠模型2、实验动物种属：SD大鼠3、实验动物性别：雄性4、实验动物年龄：5周5、实验动物体重：150g-160g6、实验动物环境：SPF级。1、实验方法：用酒精诱导法。大鼠每天按10mL/kg体重灌服酒精混合物（酒精：吡唑：玉米油＝10mL：25mg：2mL）造模，每周2次按0.3mL/kg剂量腹腔注射给予CCl4:橄榄油＝1：3，连续灌服60天。解剖取肝脏进行组织病理学检查。2、检测标准：肝组织可见肝硬化病理改变（S1级~S4级）。可以简化实验操作和样品收集。

    步骤3、pmsg处理c57bl/6雌性小鼠(6周龄，平均体重20g)，46h后注射hcg，与雄性小鼠合笼交配，次日取受精卵进行显微注射，将步骤1的grna1、grna2、cas9蛋白以及线性化后的打靶载体一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内，产出小鼠，即f0代小鼠。上述步骤中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl，cas9蛋白购自newenglandbiolabs，货号为m0386m。步骤4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr扩增产物测序，鉴定是否为嵌合体。本发明用于f0代小鼠pirb基因pcr鉴定的特异性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1对应的扩增产物大小为，primers2对应的扩增产物为。用于f0代小鼠测序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。什么是疾病动物模型建模？连云港疾病动物模型建模哪家好

动物模型的优越性主要表现在以下几下方面！咨询疾病动物模型建模原理

    本能发明的另一目的是公开了如上所述的方法制备的鼠慢性背根神经压迫模型的用途是将该模型用于腰椎间盘突出***方法研究和/或影像学检测研究。进一步地，该模型用于与磁性相关的***和/或检测方面的研究，比如经颅磁刺激和核磁共振。本发明利用压迫元件插入腰椎椎间孔，模拟腰椎间盘突出后突出物对神经根的持续慢性的机械压迫症状，有益效果有：1.应用机械压迫神经根模拟腰椎间盘突出病理，症状的病因学与临床情况接近；2.相关的疼痛行为类似于特定的慢性疼痛症状，且易于客观测量；3.制备方法简单，对动物损伤小，稳定性好，成功率高；4.造模关键材料压迫元件不受磁场干扰，无在磁场作用下移位风险，有利于后续对动物进行磁疗，经颅磁刺激等***及核磁共振等检查；5.造模关键材料压迫元件不影响磁场，不会对***仪器和核磁共振等仪器产生不良影响；6.此方法获得的模型由于采用了h62黄铜或聚乳酸材料制备的压迫元件，使得研究方法与检测方法不受磁场作用限制，丰富了腰椎间盘突出临床前研究的***方法及影像学检测，为临床研究提供理论依据。以下将结合附图对本发明作进一步说明，以充分说明本发明的目的、技术特征和技术效果。附图说明图1是压迫元件插入椎间孔的结构示意图。咨询疾病动物模型建模原理

上海东寰生物科技有限公司是一家经营范围为：从事生物科技领域内的技术开发、技术转让、技术咨询、技术服务。化工产品（除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品）的销售。【依法须经批准的项目，经相关部门批准后方可开展经营活动】。的公司，致力于发展为创新务实、诚实可信的企业。上海东寰生物拥有一支经验丰富、技术创新的专业研发团队，以高度的专注和执着为客户提供原代细胞，细胞增殖与凋亡，细胞检测试剂盒，动物疾病模型。上海东寰生物继续坚定不移地走高质量发展道路，既要实现基本面稳定增长，又要聚焦关键领域，实现转型再突破。上海东寰生物始终关注商务服务市场，以敏锐的市场洞察力，实现与客户的成长共赢。