拷贝数变异数字PCR服务

QuantaLife 利用油包水微滴生成技术 开发了微滴式数字PCR技术，这也是**早出现的相对成熟的数字PCR平台，在运行成本和实验结果稳定性方面都基本达到了商品化的标准。2011年，QuantaLife 公司被Bio-Rad公司收购，其微滴式数字PCR仪产品更名为QX100型号仪继续在市场上销售，这个早期型号为dPCR概念的普及和应用领域的拓展发挥了重要作用。2013年该公司又推出了升级型号QX200。2012年，RainDance公司推出Raindrop型号数字PCR设备，这个设备将其原有的二代测序文库制备平台技术平移到数字PCR技术平台，在高压气体驱动下，将每个标准反应体系分割成包含100万至1000万个皮升级别微滴的反应乳液， 该公司的创始人之一Darren Link表示这种超高的微滴数目可以为用户“提供更高的检测动态范围，适用于处理更大浓度差异的不同样品”。脑瘫患儿mtDNA拷贝数变化CNV检测。拷贝数变异数字PCR服务

肺*的ALK融合基因检测：ALK融合基因是NSCLC患者另外一个常规的伴随诊断，可以指导ALK-TKI药物的使用，目前已发现20种以上EML4-ALK的融合形式，多个报道证实它们中大部分能促进**生成。另外ALK还可能与TFG、KIF5B、KLC1、PTPN3、STRN等基因发生融合，因此ALK融合突变的诊断具有一定难度。目前临床常规使用的检测手段包括免疫组化（Immunohistochemistry，IHC），荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）以及RT-PCR等三种。这三种方法各具优缺点：IHC相对简单，价格低廉，但是容易受到主观判断的影响；FISH可以检测各种融合类型，但是操作繁琐，价格昂贵；RT-PCR方法的特异性较好，结果客观，但是只能针对已知类型。近期有研究者采用数字PCR，利用ALK基因3’端的过表达来鉴定ALK的融合，该方法既具有PCR方法特异性好、结果客观的优势，同时又不受融合类型的限制，可以检测所有融合型，在与三种传统方法的对比过程中展现出了更好的临床符合率，未来有望成为一种新的常规检测手段。上海准确数字PCR共同合作低丰度DNA模板分子的精确定量。

近几年来，随着纳米制造技术和微流体技术（nanofabrication and microfluidics）的发展，数字PCR技术遇到了突破技术瓶颈的比较好契机。1997年Kalinina, 、Brown J, 和Silver J使用纳升级芯片进行单克隆模板PCR扩增，获得了美国专利，更重要的是这种采用“电浸润法”进行纳升级芯片制造技术显露雏形。伴随二代测序技术发展起来的“油包水PCR”技术，可以一次生成数万乃至数百万个纳升甚至皮升级别的单个油包水微滴，可以作为dPCR的样品分散载体。

甲基化分析：DNA甲基化是哺乳动物DNA的一种常见表观遗传修饰，它通过调节细胞中的基因表达从而在发育和疾病过程中发挥了重要的作用。异常的DNA甲基化涉及整个基因组的整体低甲基化和位于基因启动子区域和基因间DNA的CpG岛的局部超甲基化，这是人类恶性**中一个常见的表观遗传改变。基于PCR的方法已经被***的应用于DNA甲基化的评估，其原理是先采用亚硫酸氢盐来处理DNA，这会通过脱氨基作用将未甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，然后设计与这些DNA进行特异结合的引物和探针进行扩增检测。然而，传统的PCR检测容易受到PCR抑制剂的影响，在非甲基化等位基因的背景下进行稀有甲基化等位基因检测的敏感性有限。而数字PCR是在无数个**的分隔之中进行反应，因此彼此之间较少受到抑制剂的影响，能够对传统方法检测不到的罕见甲基化等位基因进行精细的检测，未来有望将DNA甲基化作为一个具有区域性*变的预测指标或者**风险生物标志物来使用。用数字化PCR是非常不错的一个选择，而且也非常便宜。

2013年下半年，Life-technologies推出了QuantStudio 3D数字PCR系统， 这也是目前数字PCR市场上***型号的产品。采用高密度的纳升流控芯片技术，样本均匀分配至20,000个单独的反应孔中。在整个工作流程中，样本之间保持完全隔离 ，可以有效地防止样品交叉污染，减少移液过程，简化操作步骤。同时芯片式设计避免了微滴式系统可能面临的管路堵塞问题。作为Life-technologies在OpenArray芯片平台之外推出的全新的芯片式数字PCR系统，值得一提的是，这个全新的系统在设计理念上综合考虑了系统稳定性与运行成本因素，直接反映了该系统“适合所有分子生物学实验室使用的数字PCR系统”的市场定位。提高检测速度，进一步降低检测时间。广东数字PCR数字PCR经验丰富

高精确度、高灵敏度，荧光定量qPCR灵敏度为1%-0.1%，数字化PCR灵敏度可达0.01-0.001%。拷贝数变异数字PCR服务

使用不合适的引物可能会引入引物二聚体、非特异性扩增等，进而影响实验结果的准确性。在此，小Q建议您在设计引物时需做以下几个方面的检查，***需对设计好的引物进行BLAST比对分析，以确保引物的特异性！在数字PCR***定量实验中，对于基因突变检测、基因表达差异分析和拷贝数变异鉴定等对实验精细性要求较高的实验，需要特异性更高的Assay。QIAGEN基于QIAcuity数字PCR平台开发并验证了针对上述常见应用的700多组dPCR LNA Assay，所有Assay均经过锁核酸修饰来增强其对互补序列的亲和力和特异性，进而提高实验结果的准确性。拷贝数变异数字PCR服务