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乳腺*的分型：ER，PR和HER2是乳腺***常用的分子标志物，在患者在开始***之前必须要明确这几个分子标志物的具体状态。传统的检测方法是通过IHC来确定蛋白的表达情况，而HER2检测也还可以通过FISH来判断染色体的扩增情况。尽管相应的检测都有明确的指南来加以规范，但是在临床实践过程之中，有些检测结果不可避免的还是会受到人为操作和判读的主观影响，从而导致同一样本的结果偏差，为临床的治疗带来了极大的困惑。有研究者尝试采用四重数字PCR方法，对这几个标志物同时进行定量检测。95例石蜡标本的对比分析结果显示，HER2，ER和PR与IHC的一致性分别为96.8%，91.5%和85.1%，而ROC曲线下面积则分别为0.991，0.977和0.920，说明该方法与IHC方法有较好的一致性。此外，相比于IHC方法，数字PCR方法还具有操作和判读标准化、结果重复性好、检测周期短、标本使用量少等优势，未来在临床将会有很好的应用前景。线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析。江苏核酸拷贝数定量数字PCR欢迎咨询

甲基化分析：DNA甲基化是哺乳动物DNA的一种常见表观遗传修饰，它通过调节细胞中的基因表达从而在发育和疾病过程中发挥了重要的作用。异常的DNA甲基化涉及整个基因组的整体低甲基化和位于基因启动子区域和基因间DNA的CpG岛的局部超甲基化，这是人类恶性**中一个常见的表观遗传改变。基于PCR的方法已经被***的应用于DNA甲基化的评估，其原理是先采用亚硫酸氢盐来处理DNA，这会通过脱氨基作用将未甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，然后设计与这些DNA进行特异结合的引物和探针进行扩增检测。然而，传统的PCR检测容易受到PCR抑制剂的影响，在非甲基化等位基因的背景下进行稀有甲基化等位基因检测的敏感性有限。而数字PCR是在无数个**的分隔之中进行反应，因此彼此之间较少受到抑制剂的影响，能够对传统方法检测不到的罕见甲基化等位基因进行精细的检测，未来有望将DNA甲基化作为一个具有区域性*变的预测指标或者**风险生物标志物来使用。北京高灵敏度数字PCR方案近年来，Bio-Rad、凯杰、赛默飞等巨头公司纷纷通过收购、投资等方式布局数字PCR业务。

拷贝数变异(CNV)研究：数字PCR直接读取阳性信号，通过泊松分布校正得到目标基因的***拷贝数，为拷贝数变异的研究提供了***的检测精度。采用数字PCR能够有效对二代测序（NGS）和微阵列比较基因组杂交（aCGH）等实验结果进行验证，并具有检测周期短、成本低、样本通量高等特点。低丰度DNA模板分子的精确定量：由于绝大部分微液滴中只含单个或不含模板分子，使得低丰度DNA模板分子的扩增不受高丰度模板分子扩增的竞争抑制：与此同时，样品中可能存在的抑制剂也在分配到微液滴的过程中进行了相对稀释，作用于单个微液滴内模板扩增的抑制剂数量大幅降低，从而提高PCR扩增对抑制剂的耐受程度，因此可应用于诸多临床样品（如血液、尿液、粪便、痰液、胸腹水、脑脊液等）中痕量核酸标记物的检测。一般而言，定量PCR的检测灵敏度约在1%，NGS的灵敏度可达到1%，而数字PCR的检测下限可轻松实现0.01%。

***代PCR技术是常规PCR技术，对目的基因扩增后进行凝胶电泳，将扩增条带与已知浓度的标准品比较，得到定性结果，但在产物分析时需要开盖操作，容易引起交叉污染，导致假阳性。第二代PCR技术是在PCR反应体系加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应进程，通过相关数据分析方法对目的基因进行定量分析的技术。数字PCR是第三代PCR技术，是一种采用微流控或微滴化的方法将稀释后的待测样品核酸溶液分散至微反应器或微滴中再在相同条件下进行单分子PCR，检测每一个微反应器或微滴中荧光信号通过直接计数或泊松分布修正得到原始浓度或含量的核酸分子***定量技术。目前大致可分为三类：微反应室/孔板数字PCR、大规模集成微流控芯片数字PCR、液滴数字PCR。不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线。

肺*的EGFR突变检测：EGFR突变目前已成为非小细胞肺*（Non-Small-Cell Lung Cancer，NSCLC）患者常规的伴随诊断，对于EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的使用具有重要的指导作用。然而，由于多数NSCLC都处于晚期，很难取到足够的**组织完成该检测，不方便对患者的疗效和耐药情况进行动态监测。相反，血液、胸水以及脑脊液之类的体液标本中会含有**来源的DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA），它们更容易获取，被认为是组织标本的有效替代品。由于体液标本中ctDNA的含量非常低，因此对检测方法提出了很高的要求。近年来，有研究者证实，数字PCR的检测敏感性可以低至0.04%，EGFR突变的血浆检测与组织学检测能够有很好的吻合性，相比于传统的检测方法，数字PCR可以***提高血浆中EGFR突变的检出率。此外，利用数字PCR***定量的优势，可以对血浆中EGFR突变的丰度进行动态监测，这种动态变化与患者使用TKI的疗效密切相关，可以更好的指导患者的***。随着越来越多循证医学证据的出现，NSCLC的血液EGFR突变检测正在成为ddPCR相当有前景的应用方向。提高检测通量，可对多个靶标多个标本并行检测。江苏Digital PCR数字PCR方案

基因丰度非常低的，或者样本浓度低的，可以选择数字化PCR。江苏核酸拷贝数定量数字PCR欢迎咨询

值得注意的是，在gDNA长度≥20kb或进行拷贝数变异检测实验时，必须对样品进行酶切处理，确保大片段DNA序列或串联序列在酶切处理后，模板随机且均匀的进入**反应体系，以实现准确和精确的定量。数字PCR实验离不开包含有Mg2+、dNTP、Buffer和DNA聚合酶等PCR反应所需要的MasterMix。随着实验的不断深入，对于实验条件的要求也不断提高，其中DNA聚合酶对实验的准确性起着至关重要的作用。由于非热启动的DNA聚合酶在反应体系易使引物在室温条件下发生非特异性扩增，直接影响实验结果。江苏核酸拷贝数定量数字PCR欢迎咨询