上海数据库外泌体活动

    在一项发表于Nanoscale杂志的研究中，研究者提出了一种基于新型巯基（NovelThiol-Based）的胞外囊泡荧光标记方法，采用共聚焦显微镜等方法观察在*细胞源性外泌体在***细胞中的动态变化。制备荧光标记外泌体的步骤如下：1.取200μg/ml的C5-马来酰亚-Alexa488（绿色荧光）或C5-马来酰亚-Alexa633（红色荧光）µl，加入提取好的含60-100µg蛋白质的30ul外泌体样品中，以PBS补足至50ul，不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。2.在孵育时将exosomespincolumns（Invitrogen）试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750xg离心2分钟，弃收集管，向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体4.将柱子置于xg离心3分钟，多余的染料会被树脂吸附5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM，于μm过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。以这种方法制备的外泌体在HELA细胞中，随着时间延长，带有绿色荧光（EV488）的外泌体逐渐密集于细胞核周围，可以明显观察到外泌体的动态变化过程。血液样本的外泌体怎么制备？上海数据库外泌体活动

(1) 采集前/中后段晨尿，应该尽量选择受试者的“新鲜”尿液100ml，并注意避免细菌污染，收集前注意对饮食的控制，于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 并于3000×g离心15min，去除细胞或细胞碎片；

(3)   -80℃冰箱中保存。

脑脊液：

(1) 收集脑脊液10ml，采集方式为腰椎穿刺，样本一经分离，请务必立即置于冰上或4℃短暂保存（不得超过4 h）,避免受到血液污染,勿使用含肝素抗凝剂的采样管收集盛放；

(2) 并于3000×g 离心15min，去除细胞或细胞碎片；

(3)   -80℃冰箱中保存。

    有些研究证明外泌体miRNA的表达水平在不同生理条件下是会变化的。在健康人血清外泌体中，miR-21的水平比那些恶性胶质瘤患者更低。在非小细胞肺*患者血浆囊泡中，let-7f,miR-20b和miR-30e-3p的水平比正常对照组更低。在良性**和卵巢*中，发现了八种外泌体miRNA的表达水平不同，包括miR-21和miR141。以上研究都表明外泌体的来源细胞有一种分拣机制来指导特异性的miRNA进入外泌体。根据前人的研究，存在一种类型的miRNA，它们更偏好于被装入外泌体，如miR-320和miR-150。miR-320家族***分布于正常组织和**分泌的外泌体中。miR-150在HEK293T细胞株、**患者的外周血、集落刺激因子-1诱导的骨髓来源的巨噬细胞和结肠*患者血清中的外泌体中都有高表达。而且，一些miRNA，如miR-451，在正常细胞来源的外泌体中高表达，如HMC-1细胞株、HEK293T细胞株和初级T淋巴细胞。还有一些miRNA，如miR-214和miR-155，在**细胞株来源的和**患者外周血的外泌体中含量丰富。

    Nature：从血液通过exosomes入手早期确诊**。原文标题：Glypican-1identifiescancerexosomesanddetectsearlypancreaticcancer。原文摘要：Exosomes are lipid-bilayer-enclosed extracellular vesicles that contain proteins and nucleic acids. They are secreted by all cells and circulate in the blood. Specific detection and isolation of cancer-cell-derived exosomes in the circulation is currently lacking. Using mass spectrometry analyses, we identify a cell surface proteoglycan, glypican-1 (GPC1), specifically enriched on cancer-cell-derived exosomes. GPC1+ circulating exosomes (crExos) were monitored and isolated using flow cytometry from the serum of patients and mice with cancer. GPC1+ crExos were detected in the serum of patients with pancreatic cancer with absolute specificity and sensitivity, distinguishing healthy subjects and patients with a benign pancreatic disease from patients with early- and late-stage pancreatic cancer. Levels of GPC1+ crExos correlate with tumour burden and the survival of pre- and post-surgical patients. 那么外泌体的优势都有哪些呢？

胸水：

(1) 临床收集胸水后若不能**时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 将收集到的胸水1000 g离心10 min，收集上清液；

(3) 将得到的胸水上清3000 g离心10 min，收集上清；

(4)   -80℃冰箱中保存。

腹水：

(1) 临床收集腹水后若不能**时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 将采集到的腹水在4℃下（室温亦可）离心2000 g，20   min，去除腹水中的残渣；

(3) -80℃冰箱中保存。

(1) 用无菌容器收集胆汁；

(2) 将收集到的胆汁在4℃下，3000 g离心10 min去除细胞沉渣和碎片；

(3) 收集胆汁上清液，4℃或者-20℃长期保存。

外泌体的优缺点您知道吗？上海数据库外泌体活动

2019**火的7大热点方向，纵观2019年的国自然评审结果，非编码 RNA、m6A、外泌体、**免疫、细胞自噬、肠道菌群、干细胞等大方向属于科研热点。外泌体在生物学过程中扮演着重要角色，以及它作为疾病诊断与***的特殊功能。其在基金中一般存在有两种作用途径，一种是作为靶向***病灶的载体，一种是促进疾病进程的因素来研究。外泌体与miRNA的热点交互这两年也一直中标数相当可观，2019年外泌体相关项目多达519项，高于2018年的420项，热度稳中有升。

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