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⊙外泌体的大小:外泌体的直径约40-150nm
⊙从研究上来讲并不太严格区分外泌体(exosomes)或微泡(microvesicles)
⊙外泌体属于胞外囊泡类,除了外泌体之外细胞还分泌微泡以及其它的膜囊泡
⊙外泌体的直接比微泡的要小,后者直径为100nm-1μm
⊙外泌体的数量:人体中大约有1014个,近乎于平均每个细胞产生1000-10000个
⊙外泌体的细胞源:人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体
⊙外泌体具有异质性,即使是同一种细胞分泌的外泌体都有可能具有很大功能区别
⊙外泌体的存在:外泌体几乎存在于所有的组织、细胞间隙、体液中
⊙外泌体产生于细胞中的多泡体 胆汁样本外泌体怎么制备?四川提取试剂盒外泌体售后服务
UR51102外泌体**培养基。UR52121适用于细胞上清(尿液),可提取400ml细胞上清液。UR52126适用于尿液,可提取500ml尿液。UR52131适用于血清血浆,可提取20ml,应用于蛋白方向CHEM COMMUN-IF=6.2-糖基化-UR52136。UR52136适用于血清血浆,可提取30ml,应用于RNA方向。UR52141适用于提取体液,可提取60mlJ CELL MOL MED-IF=4.7-睾丸损伤-UR52101。UR52111适用于细胞上清液/尿液中外泌体的浓缩J CELL PHYSIOL-IF=4.5-白血病-UR52121。UR90102试剂盒配套纯化柱。UR52301适用于外泌体CD63和TSG101蛋白的检测。UR52302适用于外泌体的标记染色实验,监测细胞吞噬作用。UR52303适用于外泌体的标记染色实验,监测细胞吞噬作用。UR21017适用于***成像和示踪FRONT。UR33101适用于高效裂解外泌体蛋白,也可用于细胞裂解。UR52135适用于血清血浆,可提取5ml,应用于 RNA 方向。UR52130适用于血清或血浆,可提取6m。UR52100适用于细胞上清或者尿液,可提取100ml。UR52101适用于所有样本CANCER。
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外泌体CD63&Tsg101检测试剂盒:外泌体CD63&TSG101蛋白检测试剂盒是针对外泌体标志蛋白CD63和TSG101检测而研发的一款高效且方便的试剂盒产品。该产品中包含外泌体蛋白**裂解液:其组分经过优化处理,可高效裂解外泌体;CD63&TSG101蛋白阳性对照品:由Hela细胞裂解后制备而成,可用于监测实验体系;CD63和TSG101抗体:该抗体经过严格筛选而得,适用于外泌体CD63和TSG101蛋白的检测。操作指南1、实验准备:实验前先将裂解液融化混匀后置于冰上(如有沉淀析出,可37℃加热至溶解);2、将外泌体样本与裂解液按体积比1:1添加混匀,置于冰上裂解10min;3、12000g离心5min,取上清,进行BCA蛋白浓度测定及WesternBlot等实验;4、进行SDS-PAGE实验时,取CD63&TSG101阳性对照品10μg与实验样品同时进行。
分离:超速离心法:超速离心法是外泌体分离**常见的技术之一。据不完全统计,约有1/2的研究者会选择该种方式分离外泌体。该方法由几个离心步骤组成,可分步去除细胞、细胞碎片和大囊泡,沉淀外泌体。但该种方法用于血浆和血清等粘性生物液体时效率较低,且重复离心操作有可能对外泌体造成损害,从而降低其质量。如将超速离心配合蔗糖溶液进行梯度密度离心可得到纯度更高的外泌体,是公认可以得到**高纯度的分离方法。但此法对离心时间非常敏感,一般需要8-30h,产率较低,同样不适用于血浆和血清等粘性生物液体中外泌体的分离,因此难以***普及。聚合物沉淀法:第二大主流的外泌体分离技术就是基于聚合物的沉淀法了,**常见的聚合物是聚乙二醇(PEG)。通常将含有聚合物的沉淀溶液与生物体液混合,4℃温育,低速离心,沉淀外泌体。目前已有成熟的PEG-base商业试剂盒,比如图中的ExoQuick™(SystemBiosciences)。这类试剂盒使用容易和快速,不需要额外的设备,且随着产品不断更新换代,提取效率和纯化效果逐渐提高,因而逐渐取代超速离心法并推广开来。沉淀法的主要缺点是分离物中会有少量的聚合物存在。不过大家不用担心,一般来说这些物质不会干扰下游分析。胸水的外泌体怎么制备?
细胞上清(需采用去除外泌体的培养基):
(1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间,贴壁细胞密度在70 %-80 %,悬浮细胞密度在60 %-70 %;
(2) 对于贴壁细胞,去除原有培养基,换为新的不含外泌体的培养基或者无血清培养基;对于悬浮细胞,300 g,4°C,10 min收集细胞;
(3) 使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养。细胞继续培养24-48 小时,根据细胞的生长速度确定收取上清时间;
(4) 收集细胞上清,300 g,4°C,离心10 min;小心吸取上清,注意避免吸入细胞或者细胞碎片;
(5) 3000 g,4°C,再次离心15 min,确保将细胞或者细胞碎片去除干净;
(6) 取上清,注意避免吸入细胞或者细胞碎片,合并相同的细胞培养液上清样品,装入无菌的玻璃瓶,可在4°C短期保存(1-2天),长期保存可冻存于-80°C 。建议细胞上清分离后尽快进行外泌体分离,保存在4°C和-80°C,都会对产量有一定的影响。
外泌体的主要特点有很多。浙江测序外泌体售后服务外泌体RNA质检内容包括哪些?四川提取试剂盒外泌体售后服务
exoRBase由云生物平台协助复旦大学上海**研究所黄胜林研究员团队构建,该数据库于2018年1月发表在NucleicAcidsResearch杂志,文章题为:exoRBase:adatabaseofcircRNA,lncRNAandmRNAinhumanbloodexosomes。exoRBase是人类血液外泌体的RNA-seq数据分析的circRNA、LncRNA和mRNA的存储库,还包括已发表文献的实验验证。exoRBase对标准化RNA-seq数据的RNA表达谱进行了整合和可视化,数据涵盖了正常个体和不同疾病患者。数据库网址:。exoRBase数据库收集和描述人类血液外泌体中所有长的RNA,目前包含58330个circRNA、15501个LncRNA和18333个mRNA,提供了注释、表达水平和可能的来源组织,数据库将定期更新,提供更多的外泌体RNA信息。数据库收录的样本包括健康对照者32例,冠状动脉心脏疾病(CHD)6例,结肠*(CRC)12例,肝细胞*(HCC)21例,胰腺腺*(PAAD)14例,乳腺*2例。所有收集到的数据都经过相同的预处理。除此之外,还分析了LncRNA和mRNA在人类组织中的组织特异性,以及circRNA的来源等。 四川提取试剂盒外泌体售后服务