江苏样本制备外泌体活动

industryTemplate细胞上清的外泌体怎么制备？江苏样本制备外泌体活动

(1) 用采血针和EDTA抗凝管抽取全血，轻柔上下颠倒混匀后室温或者4°C保存，并在1小时内进行下一步处理；

(2) 4°C条件下，使用吊桶式转头1900 g离心10 min，小心吸取上清即为血浆，***500 μl左右丢弃。得到的血浆再次离心，条件为4°C，3000 g，15 min，小心吸出血浆，注意不要碰到底部和侧面的沉淀物；

(3) 将血浆冻存于-80°C；干冰运输。

提示：送样量**4 ml以上（分离4 ml血浆约需要8-10 ml全血）。 江苏电镜外泌体哪家好脑脊液抽提外泌体需要提供多少量？

⊙外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层

⊙外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链

⊙外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2

⊙外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases

⊙外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流动，参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能

⊙外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中

⊙与外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族

⊙一些物质进行外泌体中是特异性的：如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列（GGAG/CCCU），进行主动包埋

胸水：

(1) 临床收集胸水后若不能**时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 将收集到的胸水1000 g离心10 min，收集上清液；

(3) 将得到的胸水上清3000 g离心10 min，收集上清；

(4)   -80℃冰箱中保存。

腹水：

(1) 临床收集腹水后若不能**时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 将采集到的腹水在4℃下（室温亦可）离心2000 g，20   min，去除腹水中的残渣；

(3) -80℃冰箱中保存。

(1) 用无菌容器收集胆汁；

(2) 将收集到的胆汁在4℃下，3000 g离心10 min去除细胞沉渣和碎片；

(3) 收集胆汁上清液，4℃或者-20℃长期保存。

转移的**细胞为适应新环境，沉默了自己的基因，促进**转移灶形成，而沉默基因的正是外泌体中的microRNA。文章概要为：“Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brain metastasis outgrowth”，由外泌体分泌的microRNA引起微环境介导的PTEN丢失，为脑转移生长做了准备。这篇是2015.10.19发表在Nature 上的文章，文章主要讲的是，脑环境依赖的PTEN可回复性表达，受脑内的星形胶质细胞分泌的外泌体中的microRNA调控。血浆样品外泌体怎么制备？浙江测序外泌体价格

一个好的外泌体需要具备哪些特点您知道吗？江苏样本制备外泌体活动

    在一项发表于Nanoscale杂志的研究中，研究者提出了一种基于新型巯基（NovelThiol-Based）的胞外囊泡荧光标记方法，采用共聚焦显微镜等方法观察在*细胞源性外泌体在***细胞中的动态变化。制备荧光标记外泌体的步骤如下：1.取200μg/ml的C5-马来酰亚-Alexa488（绿色荧光）或C5-马来酰亚-Alexa633（红色荧光）µl，加入提取好的含60-100µg蛋白质的30ul外泌体样品中，以PBS补足至50ul，不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。2.在孵育时将exosomespincolumns（Invitrogen）试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750xg离心2分钟，弃收集管，向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体4.将柱子置于xg离心3分钟，多余的染料会被树脂吸附5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM，于μm过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。以这种方法制备的外泌体在HELA细胞中，随着时间延长，带有绿色荧光（EV488）的外泌体逐渐密集于细胞核周围，可以明显观察到外泌体的动态变化过程。江苏样本制备外泌体活动