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时间:2021年09月15日 来源:

    Agilent甲基化芯片通过SurePrint芯片合成**技术,结合优化的探针设计及实验方法,可灵活进行甲基化研究,得到高灵敏度、高特异性、高重复性的结果。技术流程:1.将基因组DNA超声打断成400-500bpDN**段;2.加热变性并将变性后的单链DNA样品分成两份;3.其中一份单链DNA样品加入抗5'-甲基化胞嘧啶核苷抗体。使用免疫磁珠法分离样品中甲基化DN**段的抗体复合物,样品中其余的非甲基化DN**段被洗脱;4.纯化免疫共沉淀的DN**段;对MeDIP(Cy5)与Input(Cy3)样品分别进行标记;5.标记后的MeDIP与Input样品混合、变性,与芯片杂交;6.检测杂交信号并进行数据分析。芯片种类:Agilent**甲基化芯片,8x60K●和合作伙伴在Agilent公司定制的Promoter芯片。●绝大多数基因是针对基因启动子区域的CpG岛设计探针。●芯片上一共有4160个功能注释比较明确的基因,其中2128个和**发生有关系。●从功能上分,有256基因和细胞凋亡有关,1273个基因和信号传导有关,487个基因和压力和衰老有关。●特别适用于**甲基化研究。 5mc是表观遗传重要的一种修饰,存在于植物、动物等真核生物基因组中,被誉为“第五碱基”。重庆TBS技术服务口碑推荐

安捷伦公司芯片平台因其强大的eArray探针设计平台,可以进行芯片的定制。在甲基化领域同样适用。合作伙伴利用Agilent芯片平台设计了一款专门针对**启动子区域CpG岛的甲基化芯片。绝大多数基因是针对基因的启动子区域的CpG岛设计探针。这款芯片上一共有4160个功能注释比较明确的基因,其中2128个和**发生有关系。从功能上分,有256基因和细胞凋亡有关,1273个基因和信号传导有关,487个基因和压力和衰老有关。采用的是8*60K的芯片格式。利用MeDIP原理进行甲基化检测的方法探针的分辨率可以精确到100 bp。陕西cfDNA甲基化技术服务售后分析5hmc是发现的一种修饰碱基,成为哺乳动物的“第六碱基”。

    甲基化是表观修饰的重要部分,DNA甲基化可以引起DNA构象、稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而影响基因表达。DNA链中含有很多CpG结构,双链DNACpG中的胞嘧啶五位碳原子通常容易被甲基化,基因组中60~90%的CpG都被甲基化,未甲基化的CpG成簇出现在基因启动子**序列或者转录起始位点。DNA甲基化转移酶可以催化CpG的甲基化反应。DNA甲基化转移酶有两种,Dnmt1是一种持续性甲基化转移酶,作用于只有一条链甲基化的DNA双链,使其完全甲基化,参与DNA复制过程中新合成链的甲基化修饰;Dnmt3a/Dnmt3b是一种从头甲基化转移酶,可以在CpG上产生新的甲基化修饰,首先半甲基化,继而全甲基化,该甲基化转移酶可能参与细胞生长分化的调控,在**基因甲基化中起到重要作用。近年来CRISPR/Cas9技术得到快速发展,在基因切割活性失活的dCas9的5’端融合一个Dnmt3a,能够通过dCas9介导特定位点的甲基化修饰,调控相关基因的表达。

    亚硫酸盐结合测序是DNA甲基化检测的“金标准”方案。除了全基因组甲基化测序等研究手段,对于目标基因/位点检测或者转化医学应用研究来说,需要灵活的靶向甲基化测序方案。BSP(BisulfiteSequencingPCR)结合高通量测序的TargetBisulfiteSequencing满足几个到上百个基因/位点的验证需求,具有高通量、低成本的优势,***用于临床大样本多位点的甲基化biomarker筛选及高水平文章甲基化验证环节。微生物定植对肠道免疫和代谢相关基因DNA甲基化的影响——团队成员发表.(IF=)我们以早产幼猪为模型,利用RRBS测序比较正常(n=7)和口服***(n=7)的肠道DNA甲基化差异,发现与先天免疫应答、吞噬和代谢等相关基因的DNA甲基化和表达存在***的差异,并通过高通量BSP测序对EGFL7、LBP8、PTPRE差异甲基化基因进行了验证。 甲基化验证是甲基化研究必不可少的一环。

Chip-Seq 是指通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DN**段,并对其进行纯化和文库构建;然后对富集得到的DN**段进行高通量测序,通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的 DNA 区段信息,是目前在全基因组水平研究蛋白结合靶DNA序列的重要手段,为转录因子、组蛋白修饰、核小体定位等表观遗传学的研究提供有效方法。

应用领域

1、确定组蛋白修饰的位置及其与基因表达的关系。

2、完成对转录因子及其它蛋白在基因组上结合位点的精细定位。

3、研究特定的核小体或组蛋白的分布。 ATAC-seq实验过程短,从实验到分析可达2周。Chip-seq技术服务

通过甲基化数据与耐药基因Panel数据联合分析。重庆TBS技术服务口碑推荐

    2019国自然基金解析—甲基化研究专题。从生命科学部和医学科学部总体来看:2019年度,生命科学部获自然科学基金委批准资助6478项(不含杰出青年基金项目),批准资助金额共计,单项平均资助金额。2019年度,医学科学部共批资助10138项(不含杰出青年基金项目),批准资助金额共计,单项平均资助金额。从甲基化研究方向来看,与甲基化研究相关的项目总数达283项,项目总金额超过12669万元。其中生命科学部项目总数62项,项目金额3235万元,医学科学部项目总数221项,项目金额9434万元。从2011-2019年甲基化研究方向的项目金额和项目数目分析,整体呈上升趋势;从医学科学部来看,甲基化研究项目获批数量221项,项目金额达到9434万,较之2018年度项目获批金额(7166万元)上升趋势尤为明显,可以看出,甲基化研究日益成为国自然的研究热点。 重庆TBS技术服务口碑推荐

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