数字PCR欢迎咨询

微生物（病毒、细菌等）的检测：疾病预防控制中心、出入境检验检疫局系统的实验室可以将基于TaqMan探针法的定量PCR体系无缝地转移到数字PCR上，从而满足该类实验室对于检测结果的要求：灵敏度更高、重复性更好、无需依赖标准曲线的***定量结果。其他应用：数字PCR还可以用于转基因成分的检测、移植排斥监控、肠道菌群分析以及药物基因组检测等领域。随着数字PCR荧光通道的增加和多指标检测的成熟，数字PCR将会进入更多应用领域，有力推动生命科学、医学诊断、检验检疫、农业等领域的快速发展。提取外泌体也是个非常费时费钱的事情。数字PCR欢迎咨询

数字PCR 的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值，因此不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线，具有很好的准确度和重现性，可以实现***定量分析。在未来十年内，医学保健的目标是提供质量高效的个性化医疗。PCR 方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR，数字PCR 技术有着无可比拟的优势和***的应用前景。应用领域：突变/稀有变异检测（Mutation/Rare variant detection）拷贝数变异（Copy-number variation）进入外周循环（包括血液和粪便）的**组织核酸分析无创产前筛查转化移植检测药理学（Pharmacogenetics）基因表达分析（Geneexpression analysis）-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析数字PCR可以验证二代测序(NGS)。广东数字PCR共同合作数字PCR技术为基因表达分析提供了高精确的定量分析方法。

1999年，Bert Vogelstein创造了“数字PCR”一词，文章正式报道于美国科学院院刊PNAS，并表明该技术可用于发现罕见的**突变。作者是美国**研究者、霍华德·休斯医学研究所研究员贝尔特·福格尔斯泰因（Bert Vogelstein）。目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。

cdPCR主要以Fluidigm公司的BioMark HD系统以及Life Technology公司的QuantStudio 3D系统为**。Bio Mark系统采用微泵阀式芯片，以聚二甲基硅氧烷为芯片材料，主要依靠微流控通道与阀门的开闭进行原始体系分割，在芯片的反应仓进行PCR反应，然后通过类似于基因芯片的方法扫描每个通孔的荧光信号，进行目的序列含量的计算。QuantStudio 3D系统采用阵列微池式芯片，反应液由进样孔直接进入各微反应池。芯片式dPCR生成微滴体积均一，具有较高的稳定性，体系之间影响较小，但技术操作复杂，通量有限且实验成本较高。影响引物探针特异性的因素有很多种，譬如纯化方式、设计方法以及引物探针的修饰技术等。

肺*的EGFR突变检测：EGFR突变目前已成为非小细胞肺*（Non-Small-Cell Lung Cancer，NSCLC）患者常规的伴随诊断，对于EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的使用具有重要的指导作用。然而，由于多数NSCLC都处于晚期，很难取到足够的**组织完成该检测，不方便对患者的疗效和耐药情况进行动态监测。相反，血液、胸水以及脑脊液之类的体液标本中会含有**来源的DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA），它们更容易获取，被认为是组织标本的有效替代品。由于体液标本中ctDNA的含量非常低，因此对检测方法提出了很高的要求。近年来，有研究者证实，数字PCR的检测敏感性可以低至0.04%，EGFR突变的血浆检测与组织学检测能够有很好的吻合性，相比于传统的检测方法，数字PCR可以***提高血浆中EGFR突变的检出率。此外，利用数字PCR***定量的优势，可以对血浆中EGFR突变的丰度进行动态监测，这种动态变化与患者使用TKI的疗效密切相关，可以更好的指导患者的***。随着越来越多循证医学证据的出现，NSCLC的血液EGFR突变检测正在成为ddPCR相当有前景的应用方向。基因丰度非常低的，或者样本浓度低的，可以选择数字化PCR。湖北核酸拷贝数定量数字PCR欢迎咨询

肺*T790M突变-cfDNA动态监测。数字PCR欢迎咨询

*****的实时监控：已有数篇文章报道了使用数字PCR技术对患者***过程中的循环**DNA（ctDNA）进行检测，实时监控疾病进展。在非小细胞肺*、乳腺*和肠*等多种**患者中都取得了令人鼓舞的结果。与影像学及其他常规指标相比，ctDNA突变及丰度改变通常会提前数月出现，这样就可以提醒医生及时调整***方案，使患者得到更有效的***。无创产前筛查：唐氏综合征、地中海贫血或胎儿遗传性耳聋基因检测等，目前无创检测标本来源主要为孕妇血液，检测胎儿DNA会受到母体DNA的干扰，依靠数字PCR可提高检测准确性。对比NGS，数字PCR技术可以提高工作效率、降低检测成本。数字PCR欢迎咨询