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Chip-Seq 是指通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP)特异性地富集目的蛋白结合的DN**段,并对其进行纯化和文库构建;然后对富集得到的DN**段进行高通量测序,通过将获得的数百万条序列标签精确定位到基因组上,从而获得全基因组范围内与组蛋白、转录因子等互作的 DNA 区段信息,是目前在全基因组水平研究蛋白结合靶DNA序列的重要手段,为转录因子、组蛋白修饰、核小体定位等表观遗传学的研究提供有效方法。
应用领域
1、确定组蛋白修饰的位置及其与基因表达的关系。
2、完成对转录因子及其它蛋白在基因组上结合位点的精细定位。
3、研究特定的核小体或组蛋白的分布。 全基因组甲基化测序是将重亚硫酸盐Bisulfite处理和高通量测序技术相结合。北京hMeDIP-Seq技术服务欢迎咨询
**预防和***的一个手段是通过去甲基化恢复某些关键的抑*基因或DNA修复基因的活性,目前研究**多的是DNMTs***剂,它通过***DNMT活性以逆转异常的DNA甲基化。**个表型修饰药物为5-azacytidine及其类似物5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-CdR),这类药物已经美国FDA批准用于白血病前骨髓增生异常综合征的***。5-aza-CdR是胞嘧啶的类似物,在DNA复制过程中可以掺入到DNA链中,一方面它可以降低DNA接收甲基的能力,另一方面它***DNMT活性,导致DNA甲基化水平的降低。体外和体内试验均表明,5-aza-CdR具有降低超甲基化的抑*基因甲基化水平从而*****的能力,临床表明应用5-aza-CdR可提高部分IV期小细胞肺*患者生存率,但该药也存在着不可忽视的毒副作用(如特异性不强,不能针对某一特定抑*基因进行靶向***;高剂量的5-aza-CdR可能诱发**的转移),因此其在临床上的应用受到了很大限制。也有研究表明,低剂量的As2O3可起到***肝*的目的。 重庆ATAC技术服务共同合作DNA甲基化多发生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。
RIP-seqRNAImmunoprecipitation是研究细胞内蛋白与RNA相互作用的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能更有效地发现miRNA的调节靶点。这种技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行测序分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀RIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,因此RIP实验的优化条件与ChIP实验并不相同。RIP实验下游结合二代测序技术称为RIP-seq,通过高通量测序和分析,深度解析与目标蛋白相互结合的RNA的区域或种类和相互作用强弱。应用领域1.高效获取蛋白所结合的RNA,在全转录组范围得到与蛋白有相互作用的RNA,包括mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA。2.准确获取蛋白结合RNA的特征,通过RNA结合区域的富集得到蛋白结合的RNA位置。3.通过motif分析获取蛋白结合序列的偏好性。技术优势***的确定蛋白质在细胞自然状态下与RNA结合的研究手段,可以有效的鉴定一个蛋白是否是RNA结合蛋白以及RNA结合蛋白与哪些RNA直接作用,并确定其结合位点。,得知相互作用RNA的类型。,可通过分析可得知与蛋白作用的RNA序列。
焦磷酸测序(Pyrosequencing)随着技术的不断改进,现在认为焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)是甲基化检测新的金标准。焦磷酸测序作为一种新的序列分析技术,能够快速地检测甲基化的频率,对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测,为甲基化研究提供了新的途径。在序列延伸过程中,根据C和T的掺入量来定量确定单个位点的C-T比例。因此,不同位点的甲基化变异就能被准确检测,并给出精确的甲基化程度的数据。QIAGEN公司在焦磷酸测序的应用上具有明显的优势,目前提供三种焦磷酸测序仪器,通量由低到高,适合不同的应用。PyroMarkQ24的强项在于可对多达24个样品进行焦磷酸测序。需要大样品量的应用更适合在PyroMarkQ96ID上进行。在考虑到处理成百上千个样品所需的大量试剂时,运行通量**化可能会使实验成本变得很高。而PyroMarkQ96MD装有一台高度灵敏的光检测摄像头,可以在减少试剂量的情况下对少量的DNA模板进行准确测序。这些不同平台的推出,对于我们实际研究提供了更有效的检测手段。 在正常组织里, 70%到90%散在的CpG是被甲基修饰的。
大豆驯化和改良过程中的DNA甲基化足迹(1):128.(IF=)本课题通过WGBS技术比较了野生大豆、地方品种和改良品种(n=45)在大豆驯化与改良过程中DNA甲基化的变化,鉴定了5412个甲基化差异区域(DMR),而这些DMR基因富集在碳水化合物代谢途径。这为大豆不同品种间DNA甲基化提供了有价值的图谱,拓展了大豆驯化与改良的认识。血浆DNA甲基化分析提示EBV病毒相关疾病的病因(1):3256(IF=)本研究通过对鼻咽*(NPC,n=15)、EBV相关性淋巴瘤(n=9)和传染性单核细胞增多症患者(n=5)的血浆游离DNA进行WGBS测序分析,发现EBVDNA甲基化图谱呈现疾病相关模式。这表明在鼻咽*诊断中进行血浆EBVDNA甲基化分析具有重要的潜力。 在哺乳动物中CpG以两种形式存在。陕西ATAC技术服务怎么样
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ATAC-seq(AssayforTransposase-AccessibleChromatinwithhighthroughputsequencing)是使用高通量测序对Tn5转座酶可接近的核染色质区域进行测序分析的一种研究技术;该技术由美国斯坦福大学的研究人员开发,2013年***发表在NatureMethods(Buenrostroetal.,2013)。通过转座酶对特定时空下开放的核染色质区域进行切割,获得在该时空下基因组中所有活跃转录的调控序列。应用领域,通常并不单独使用。作为检测表观遗传-染色质开放状态现象的方式,与样本基因表达谱紧密相连,从靶标基因的表观状态关联到表达水平,具有强大的数据挖掘作用。2.通过关联基因组、外显子,染色质免疫共沉淀(组蛋白修饰或转录因子结合)测序信息,形成:表观调控-基因组-基因表达的完整调控链。 北京hMeDIP-Seq技术服务欢迎咨询