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时间:2021年06月05日 来源:

    虽然焦磷酸测序可以进行单个位点甲基化程度的精确定量,但是目前来看,测序的片段长度还比较短,只有一百多bp,其中有效长度约为60bp。以上是对几种常用的特异位点甲基化检测方法进行了介绍及比较,还有一些检测技术是在常用的检测手段上进行优化或者将不同的方法进行结合应用,比如以MSP方法为基础,发展了SMART-MSP技术,该技术利用定量技术对MSP扩增过程进行检测,同时后续结合HRM技术来分析甲基化差异。此外,利用质谱平台进行甲基化检测的有MALDI-TOF技术,可以对甲基化进行精确检测并能进行高通量筛选。从对这些技术的比较分析来看,没中检测技术都有各自的优点,并也存在一定的局限性,研究者可以根据自己的实际研究情况进行选择。在特异甲基化位点检测上,能够提供BSP、HRM及焦磷酸测序三种技术的完整的检测服务,具有丰富的经验,帮助客户加速甲基化研究进程。 WGBS用于人、哺乳动物及农林牧渔方向的高水平甲基化研究。技术服务售后服务

技术优势

1、ChIP-Seq 能实现真正的全基因组分析。目前所能获得的芯片上固定的探针只能**全基因组部分序列,所获得的杂交信息具有偏向性。

2、对于结合位点分析,ChIP-Seq 通过寻找“峰”,结合分辨率可精确到10~30 bp,而芯片上探针由于长度所限,无法精确定位,即使目前比较高水平的商业芯片都无法提供可与ChIP-Seq 媲美的分辨率。

3、是所需样本数量。ChIP-chip 需要多达4~5 μg?的起始样本,在杂交之前需要进行LM-PCR,但可能导致背景增高,竞争性扩增等导致假阳性。而ChIP-Seq *需要纳克级起始材料,如SOLiD 起始材料可低至20ng。 北京技术服务经验丰富焦磷酸测序能提供杂合子缺失及细菌和病毒分型等技术服务。

相比之下,VeraCode GoldenGate甲基化分析技术更适合中通量的筛选及验证研究,它以以矩阵微珠芯片(Sentrix Array Matrix(SAM))形式分析48至384个用户指定的CpG位点。首先,将亚硫酸氢盐处理的基因组DNA 与分析oligo混合,oligo与未甲基化位点的U互补,或者与甲基化位点的C互补。杂交之后,引物延伸,并连接上位点特异的oligo来产生通用 PCR的模板。***,用标记的PCR引物生成可检测的产物。据Illumina的产品**介绍,其产品的**优势在于单个CpG位点的分辨率。其它分析将甲基化定位在一段区域,而通过Illumina分析,你能精确测定某个CpG位点的甲基化水平。

DNA甲基化对基因表达调控起着动态的重要作用。 借助MethylationEPIC BeadChip,研究人员可以基于单核苷酸分辨率定量检测基因组中的850,000多个甲基化位点。包括FFPE在内的多重样本可以并行分析,以便在每样本比较低成本的情况下实现高通量功能。依托业界**的Infinium实验分析方法,MethylationEPIC BeadChip是全表观基因组关联研究(EWAS)的理想之选。它提供了由**精选的***的覆盖范围,囊括99%的RefSeq基因,95%的CpG岛,高覆盖度的增强子区域和其他内容类别。由于超过90%的Infinium HumanMethylation450K位点内容都涵盖在内,因此新一代MethylationEPIC试剂盒对这些位点也完全支持。筛选耐药的相关biomaker及表观调控机制。

安捷伦公司芯片平台因其强大的eArray探针设计平台,可以进行芯片的定制。在甲基化领域同样适用。合作伙伴利用Agilent芯片平台设计了一款专门针对**启动子区域CpG岛的甲基化芯片。绝大多数基因是针对基因的启动子区域的CpG岛设计探针。这款芯片上一共有4160个功能注释比较明确的基因,其中2128个和**发生有关系。从功能上分,有256基因和细胞凋亡有关,1273个基因和信号传导有关,487个基因和压力和衰老有关。采用的是8*60K的芯片格式。利用MeDIP原理进行甲基化检测的方法探针的分辨率可以精确到100 bp。ATAC-seq实验过程短,从实验到分析可达2周。北京单细胞测序技术服务共同合作

全基因组甲基化测序是将重亚硫酸盐Bisulfite处理和高通量测序技术相结合。技术服务售后服务

    羟甲基化DNA免疫沉淀测序(HydroxymethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing,hMeDIP-Seq)是通过5hmC特异性抗体富集羟甲基化的DN**段,然后结合高通量测序技术在全基因组水平上以较小的数据量,快速、高效地寻找羟甲基化区域。可广泛应用于羟甲基化与疾病关系研究以及羟甲基化在胚胎发育过程中的研究。技术优势从项目背景了解、协助方案设计、实验材料选取、建库测序,到数据分析每个项目有特定的科学问题;需要专业、有价值的建议;科学、缜密的设计及时高效的沟通;以保障高质量研究成果样本要求:基因组DNA:>=3ug;样品浓度>50ng/ul;无RNA和蛋白污染建库测序:测序策略:IlluminaHiSeq,PE150;测序深度:20-30Mreads信息分析基于全基因组范围的羟甲基化分析,数据质控,Peak锋Calling,Peak锋在基因组、染色体、功能元件上的分布,多样本羟甲基化差异聚类,差异羟甲基化DMR鉴定及相关基因的功能分析,结合项目背景和科学问题的数据亮点挖掘。 技术服务售后服务

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