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基于目前的研究,miRNA分拣如外泌体有四条可能的途径,虽然深层的机制还远不够清楚。一、中性鞘磷脂酶-2(nSMase2)依赖性途径。nSMase2是***个被报道与miRNA进入外泌体有关的分子。Kosakaetal.发现nSMase2的过表达能增加外泌体miRNA的数量,相反地,***nSMase2表达减少外泌体miRNA数量。二、miRNA模体和苏素化核不均一核糖**白(hnRNPs)依赖性途径。Villarroya-Beltrietal.发现苏素化的hnRNPA2B1能识别miRNA序列上的3’端部分,引起特异性的miRNA被装入外泌体。类似的是,其他两种hnRNP家族蛋白,hnRNPA1和hnRNPC,也能与外泌体miRNA结合,提示它们也可能是miRNA分拣机制中的一员。然而,结合的模体还未明确。三、miRNA序列3’末端依赖性途径。Koppers-Lalicetal.发现尿苷化的内源性miRNA的3’末端主要存在于来自B细胞或尿液的外泌体中,而腺苷化的内源性miRNA的3’末端主要存在于B细胞中。以上两种选择模式共同提示了miRNA序列3’末端含有一个关键的分拣信号。四、miRNA诱导的沉默复合体(miRISC)相关途径。 云生物的外泌体可做WB检测。江苏提取试剂盒外泌体售后服务
与复旦大学问附属**医院合作,开发人血液外泌体中RNA的数据库(exoRBase),目前已经稳定运行三年,**个血液外泌体RNA自有数据库,形成区域数据中心,集本院所数据搜集、全球数据检索上传、文献引用、二次分析模块滚动开发、药物及治疗方案革新的重要平台;数据库***期建设同时发表于NucleicAcidsResearch,关联影响因子10分以上文章3篇,且在不断增加中。微生物分析平台:BSL-3实验室致病***原微生物数据分析平台,根据实验室现有数据,建立本地化数据自动化、智能化分析平台,加速实验室数据分析速度与产出。**全转录组研究:与南京鼓楼医院合作,对其测定的乳腺*组织RNA-seq样本进行***重新分析(原有基础分析无法获得有效靶点),并联系**对其原始科研方案进行修改,同时进行大规模数据挖掘,弥补其有效样本不足问题(两期分析,共入组800余例深度测序样本);通过分析,获得8个全新的与乳腺*转移复发相关的LncRNA和cicleRNA候选靶点;我方联系第三方公司与医院实验室同时进行平行双盲有效性验证,通过260例实际人体样本检测,8个靶点在98%的样本中与预测结果完全一致,且平行实验结果完全吻合。 浙江WB外泌体销售外泌体的好处有很多。
样本准备注意事项:●采集的样本需要符合纳入标准:如年龄、肥胖(身高、体重)、血糖血脂血压、诊断情况等。●统一早晨空腹**,尽量避免样本间的差异影响。●如个别样本发生溶血,则弃掉。●样本编号用油性笔清楚地写在管壁及管盖上。●离心管在放入冰箱前,用封口膜密封。●如果提供的是冻存细胞株,需提供详尽的复苏方法。●细胞培养基必须使用去除exosome(de-exosome)的血清或者无血清培养基(例如ThermoFisher的SFM)。●分离外泌体前的样品不能加入任何RNA保护剂(如Trizol)。●分离好的外泌体如需进行电镜观察,需要放4°C保存,并且不宜保存太久。●全血建议使用PAXgene管保存,不可冻融,取血后尽早制备血浆或血清,血浆或血清可以-80°C保存,但应避免反复冻融。●储存条件以及储存时间影响外泌体得率,保存在-80℃冰箱中的样本,如果储存时间过长,外泌体产量也会***降低。●干冰运输应采用壁厚且质量完好的泡沫箱,24小时到达的,干冰数量不得低于5公斤;48小时到达的,干冰数量不得低于8公斤;夏季适当增加干冰(倍)。
外泌体样本准备——血浆样品(不能用肝素抗凝):(1) 用**针和EDTA抗凝管抽取全血,轻柔上下颠倒混匀后室温或者4°C保存,并在1小时内进行下一步处理;
(2) 4°C条件下,使用吊桶式转头1900 g离心10 min,小心吸取上清即为血浆,***500 μl左右丢弃。得到的血浆再次离心,条件为4°C,3000 g,15 min,小心吸出血浆,注意不要碰到底部和侧面的沉淀物;
(3) 将血浆冻存于-80°C;干冰运输。
提示:送样量**4 ml以上(分离4 ml血浆约需要8-10 ml全血)。 胆汁抽提外泌体需要提供多少量?
血清样品(有条件的话尽量采用血浆,避免血小板来源的外泌体影响):
(1) 用**针和普通血清管(不含任何试剂,10ml规格)**10 ml;
(2) 室温静置 30 min,然后4°C条件下,静置3-4小时(此时可见血块析出);
(3) 用移液器吸取上面的淡黄色血清(应该有4 ml左右)转入15 ml离心管中,4°C条件下 3000g离心15min,小心取上清转入新的15 ml离心管中,**程度保证血清质量;
(4) 离心后的血清15分钟内冻存于-80°C冰箱;
提示:送样量**4 ml以上(分离4 ml血清约需要10-15ml全血)。
细胞上清的外泌体怎么制备?浙江WB外泌体销售血浆样品抽提外泌体需要提供多少量?江苏提取试剂盒外泌体售后服务
转移的**细胞为适应新环境,沉默了自己的基因,促进**转移灶形成,而沉默基因的正是外泌体中的microRNA。文章概要为:“Microenvironment-induced PTEN loss by exosomal microRNA primes brain metastasis outgrowth”,由外泌体分泌的microRNA引起微环境介导的PTEN丢失,为脑转移生长做了准备。这篇是2015.10.19发表在Nature 上的文章,文章主要讲的是,脑环境依赖的PTEN可回复性表达,受脑内的星形胶质细胞分泌的外泌体中的microRNA调控。江苏提取试剂盒外泌体售后服务