宁波脱靶检测实验室

对基于慢病毒/逆转录病毒载体的基因zhiliao产品，如出现与可复制xingbing毒可能相关的不良事件，还应开展可复制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的检测。关于基因编辑产品的特殊考虑基因编辑产品除了适用基因zhiliao产品的一般考虑以及整合性载体的特殊考虑外，长期随访中还应额外关注脱靶风险，量化评估脱靶活性和在靶活性之间的相关性，或利用在靶活性来预测脱靶活性的水平。如果基因zhiliao产品通过全身给yaofang式递送，长期随访中的安全性监测不仅包括靶qiguan或靶组织的脱靶活性，而且还应包括可能发生在其他组织和qiguan中的脱靶活性。脱靶检测简单有效的方法之一是全基因组测序法。宁波脱靶检测实验室

TCR修饰免疫细胞的脱靶毒性可通过评估TCR与人体自身抗原肽的交叉识别能力来评估。首先，应采用体外试验测定TCR修饰的免疫细胞与人自身抗原肽-HLA（与递呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）复合物的亲和力，并说明抗原肽的选择依据及选择范围。此外，还应研究其他相关或不相关的蛋白中是否含有靶抗原肽序列。如果TCR与人自身抗原肽有交叉反应可能，应确定靶抗原肽的较小识别基序（motif），并采用计算机预测分析评估交叉反应性。如果计算机预测可识别出具有潜在交叉反应性的抗原肽，应在体外测定TCR修饰免疫细胞对表达相应蛋白或递呈相应抗原肽的的细胞的识别能力。如果不能排除交叉反应性，应基于含有潜在交叉反应性抗原肽的蛋白的表达模式以及TCR与潜在交叉反应性抗原肽的亲和力来进行风险评估。为获得TCR与其他等位HLA潜在交叉反应性的信息，应进行充分的HLA交叉反应性筛选。对于TCR修饰的T细胞，还应关注引入TCR链和内源性TCR之间的错配可能性，应描述和说明旨在降低错配可能性的TCR设计策略。南通种子基因脱靶检测方法基因编辑脱靶将无处隐藏。

基于已有科学经验和既往非临床/临床研究结果，如果认为基因修饰细胞所采用的载体系统可将外源基因整合到细胞基因组中并可在体内长期存续，需综合分析以上风险因素，评估潜在的插入突变、致瘤/致性风险。非临床研究，应采用具有代表性的基因转导细胞进行基因整合位点分析，分析细胞的克隆组成以及在关注基因（如liu相关调控基因）附近有无优先整合迹象，含有关注整合位点的细胞有无优先异常增殖。对于嵌合抗原受体（Chimericantigenreceptor，CAR）或T细胞受体（Tcellreceptor，TCR）修饰的免疫细胞，应尽可能采用多种方法评估其靶点相关毒性和脱靶毒性风险。

Guide-seq原理图，Discover-seq细胞内的脱靶切割一般无法直接捕获，除了Guide-seq这种连接dsODN来间接记录脱靶位点的方法外，研究者们还想出一种蛋白介导的方法Discover-seq。由于DNA双链断裂后细胞会启动DNA修复机制，大量蛋白参与到断裂处的修复，所以研究者就对相关蛋白进行筛选，找到其中MRE11结合DNA的位点与DNA双链断裂的相关性比较好。DISCOVER-seq便是通过MRE11的CHIP-seq（染色质免疫共沉淀）来反映CRISPR的脱靶位点。。。。高深度全基因组重测序服务,该方法能多方位精细地对基因编辑的细胞或个体进行off-target检测。

临床研究人群，如果一种基因zhiliao产品具有引起迟发性不良反应的风险，需要开展长期随访观察时，所有接受基因zhiliao产品的受试者在签署知情同意书后均应入组长期随访临床研究。在设计长期随访临床研究的方案时，应考虑目标受试者人群及特征、整体健康情况以及接受zhiliao的患者的预期生存期等特征对迟发性不良反应的收集的影响。通常来说，当临床研究人群的某些特征（如预期寿命短、多重合并症、以及暴露于放疗或化疗等其他药物）可能干扰迟发性不良反应的观察分析时，会影响长期随访观察在评估和减轻受试者风险方面的效用；而在病情较轻或较局限，合并症以及伴随zhiliao有限或较稳定的受试者中，通过长期随访观察收集到的评估数据可能更容易分析。脱靶检测技术是一系列针对CRISPR/Cas9系统作用机制研发的用于确定CRISPR/Cas9系统基因编辑准确性检测工具。嘉兴off-target脱靶检测服务

通过对DSB的标记实现了全基因组无偏脱靶检测，如IDLVs、BLESS、GUIDE-seq技术等。宁波脱靶检测实验室

基因zhiliao产品特有的可能会引起迟发性不良反应的风险因素包括：基因组整合活性基因zhiliao产品可能会采用修饰宿主基因组的技术，并有可能在宿主细胞或组织中持续存在。很多基因zhiliao载体的基因整合不会指向基因组的特定位点，可能在整合位点处产生插入突变、或jihuo整合位点附近的原基因等，进而破坏重要基因功能或增加恶性liu的风险，例如，国外已有多项研究报告在接受了使用γ-逆转录病毒载体转导的基因修饰细胞zhiliao的受试者中发生白血病。因此，对于存在此类风险的产品，有必要进行长期随访临床研究以评估出现迟发不良反应的风险。宁波脱靶检测实验室